摘要

本研究(jiu)的(de)目(mu)的(de)是評估三種營養(yang)狀(zhuang)態下十(shi)(shi)二指(zhi)(zhi)(zhi)腸(chang)成分(fen)(fen)的(de)變(bian)化：禁(jin)食、喂(wei)養(yang)和(he)(he)高(gao)(gao)(gao)脂(zhi)(zhi)(zhi)肪喂(wei)養(yang)狀(zhuang)態。健康受試(shi)者在(zai)非連續(xu)日服用兩次等熱量(liang)膳食。隨后(hou)，每30分(fen)(fen)鐘采集一次十(shi)(shi)二指(zhi)(zhi)(zhi)腸(chang)樣本，然后(hou)根據pH值、脂(zhi)(zhi)(zhi)解產物、膽汁(zhi)鹽(yan)、磷脂(zhi)(zhi)(zhi)、滲(shen)透壓和(he)(he)表面張力(li)對其(qi)進行(xing)表征。由(you)此產生的(de)時間(jian)曲(qu)線顯(xian)示(shi)出波(bo)動模式，反映了受試(shi)者之間(jian)和(he)(he)受試(shi)者內(nei)部的(de)高(gao)(gao)(gao)度(du)可(ke)(ke)變(bian)性(xing)。高(gao)(gao)(gao)脂(zhi)(zhi)(zhi)肪液體(ti)餐的(de)高(gao)(gao)(gao)脂(zhi)(zhi)(zhi)肪百(bai)分(fen)(fen)比不會改變(bian)十(shi)(shi)二指(zhi)(zhi)(zhi)腸(chang)成分(fen)(fen)。單甘酯占總脂(zhi)(zhi)(zhi)質的(de)5%至88%，是主要的(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)肪分(fen)(fen)解物質，其(qi)次是游(you)離脂(zhi)(zhi)(zhi)肪酸(suan)。在(zai)給藥(yao)后(hou)30分(fen)(fen)鐘內(nei)，禁(jin)食、喂(wei)食和(he)(he)高(gao)(gao)(gao)脂(zhi)(zhi)(zhi)喂(wei)養(yang)狀(zhuang)態下，個(ge)體(ti)十(shi)(shi)二指(zhi)(zhi)(zhi)腸(chang)內(nei)脂(zhi)(zhi)(zhi)質產物濃度(du)分(fen)(fen)別為0.0–5.5、1.0–14.9和(he)(he)3.1–22.4 mg/mL。膽汁(zhi)鹽(yan)的(de)相(xiang)應值分(fen)(fen)別為2.0–9.0、6.9–9.3和(he)(he)4.4–30.3 mM，磷脂(zhi)(zhi)(zhi)的(de)相(xiang)應值分(fen)(fen)別為0.06–2.4、2.6–5.7和(he)(he)1.4–9.3 mM。但沒有發現具(ju)體(ti)的(de)趨(qu)勢。這(zhe)項研究(jiu)說明(ming)了攝入(ru)食物后(hou)可(ke)(ke)能導致的(de)可(ke)(ke)變(bian)腔內(nei)條件。由(you)于十(shi)(shi)二指(zhi)(zhi)(zhi)腸(chang)內(nei)事件（如十(shi)(shi)二指(zhi)(zhi)(zhi)腸(chang)內(nei)溶(rong)解）影響水溶(rong)性(xing)差和(he)(he)/或高(gao)(gao)(gao)度(du)親脂(zhi)(zhi)(zhi)性(xing)藥(yao)物的(de)吸收，這(zhe)種變(bian)異性(xing)可(ke)(ke)能導致經常觀察到的(de)高(gao)(gao)(gao)度(du)可(ke)(ke)變(bian)的(de)藥(yao)物血漿時間(jian)曲(qu)線。

介紹

腸腔內(nei)藥物(wu)濃度(du)(du)是決定藥物(wu)跨腸上皮轉(zhuan)運的(de)關(guan)(guan)鍵因素(su)之一。最近有(you)(you)報道(dao)直接測(ce)量腔內(nei)藥物(wu)濃度(du)(du)；1-3然而，這與各種困(kun)難有(you)(you)關(guan)(guan)。因此，基于體外溶解度(du)(du)測(ce)定的(de)腔內(nei)藥物(wu)濃度(du)(du)評估將(jiang)是一種更實用的(de)方法。4.

迄今為(wei)止，普通(tong)水緩(huan)沖(chong)液(ye)通(tong)常(chang)用(yong)(yong)(yong)于藥(yao)典溶(rong)解(jie)度(du)(du)測定(ding)(ding)。由(you)于這些(xie)簡單(dan)(dan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)緩(huan)沖(chong)系(xi)統在(zai)(zai)(zai)(zai)生(sheng)理(li)上不相(xiang)關，它們(men)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)使(shi)用(yong)(yong)(yong)可(ke)能導致(zhi)低(di)估(gu)小腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)中的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)溶(rong)解(jie)度(du)(du)，尤其(qi)(qi)是對(dui)于水溶(rong)性差和(he)(he)(he)(he)/或(huo)高(gao)度(du)(du)親脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)性藥(yao)物(wu)(wu)(wu)。作(zuo)為(wei)小腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)內(nei)容物(wu)(wu)(wu)替(ti)代物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)新培(pei)養基(ji)很(hen)難定(ding)(ding)義，因(yin)為(wei)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)腔的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)成分是各種因(yin)素（包括pH值、膽(dan)汁分泌和(he)(he)(he)(he)食(shi)(shi)物(wu)(wu)(wu)消(xiao)化(hua)(hua)產(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu)）相(xiang)互作(zuo)用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)結果。在(zai)(zai)(zai)(zai)過(guo)去的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)十年中，為(wei)了(le)更好地反(fan)映體內(nei)情(qing)況(kuang)(kuang)，已經做出了(le)一(yi)(yi)些(xie)努(nu)力來提高(gao)溶(rong)解(jie)度(du)(du)和(he)(he)(he)(he)溶(rong)出度(du)(du)測定(ding)(ding)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)相(xiang)關性；最常(chang)用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)替(ti)代品是禁食(shi)(shi)狀(zhuang)態(tai)模擬腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)液(ye)（FaSSIF）和(he)(he)(he)(he)喂食(shi)(shi)狀(zhuang)態(tai)模擬腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)液(ye)（FeSSIF）。5–9盡管進(jin)(jin)行了(le)多次嘗試(shi)，但對(dui)當(dang)前使(shi)用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)相(xiang)關介質(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)評(ping)論仍定(ding)(ding)期發(fa)表，包括對(dui)緩(huan)沖(chong)系(xi)統的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)評(ping)論，與膽(dan)鹽混(hun)合物(wu)(wu)(wu)相(xiang)比，使(shi)用(yong)(yong)(yong)單(dan)(dan)一(yi)(yi)膽(dan)鹽種類，以及沒有(you)(you)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)消(xiao)化(hua)(hua)產(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu)。8,10,11此外，近年來對(dui)胃腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)環境組成的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)了(le)解(jie)有(you)(you)所(suo)增加，尤其(qi)(qi)是在(zai)(zai)(zai)(zai)美聯儲國家。11–13進(jin)(jin)餐(can)后，膳(shan)食(shi)(shi)甘(gan)油三酯水解(jie)為(wei)單(dan)(dan)甘(gan)酯和(he)(he)(he)(he)游離(li)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)肪(fang)酸(suan)，主要是通(tong)過(guo)十二指腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)中的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)胰(yi)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)肪(fang)酶(mei)作(zuo)用(yong)(yong)(yong)。眾所(suo)周知，這些(xie)分解(jie)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)肪(fang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)消(xiao)化(hua)(hua)產(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu)可(ke)以對(dui)高(gao)度(du)(du)親脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)性化(hua)(hua)合物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)溶(rong)解(jie)性產(chan)(chan)生(sheng)積極影響(xiang)。7,14–16這一(yi)(yi)知識已成功應(ying)用(yong)(yong)(yong)于脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)基(ji)給藥(yao)產(chan)(chan)品的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)配方中，以提高(gao)腔內(nei)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)濃(nong)度(du)(du)。17該(gai)信息還導致(zhi)了(le)一(yi)(yi)些(xie)研究，其(qi)(qi)中評(ping)估(gu)了(le)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)相(xiang)關培(pei)養基(ji)中脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)產(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu)，尤其(qi)(qi)是脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)肪(fang)酸(suan)和(he)(he)(he)(he)單(dan)(dan)甘(gan)酯的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)摻(chan)入情(qing)況(kuang)(kuang)。7,14,16,40然而，到(dao)目前為(wei)止，尚未就(jiu)優先使(shi)用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)消(xiao)化(hua)(hua)產(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)濃(nong)度(du)(du)、類型或(huo)鏈(lian)長達成一(yi)(yi)致(zhi)。此外，我們(men)應(ying)該(gai)意識到(dao)腔內(nei)環境在(zai)(zai)(zai)(zai)不斷(duan)變化(hua)(hua)，特別(bie)是在(zai)(zai)(zai)(zai)進(jin)(jin)食(shi)(shi)后：進(jin)(jin)入的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)糜會影響(xiang)十二指腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)pH值；神經和(he)(he)(he)(he)激素信號(hao)刺激膽(dan)囊收(shou)縮、胰(yi)酶(mei)流(liu)動和(he)(he)(he)(he)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)運動。這一(yi)(yi)過(guo)程是由(you)胃和(he)(he)(he)(he)十二指腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)中存在(zai)(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)膳(shan)食(shi)(shi)營養素，特別(bie)是脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)解(jie)產(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu)引起的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。因(yin)此，酶(mei)復合物(wu)(wu)(wu)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)肪(fang)酶(mei)-大腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿菌酶(mei)從脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)滴表面釋放單(dan)(dan)甘(gan)酯和(he)(he)(he)(he)游離(li)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)肪(fang)酸(suan)，隨后可(ke)作(zuo)為(wei)膽(dan)汁成分形成的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)混(hun)合膠束的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)部分被吸收(shou)。18

為(wei)了進一步提高(gao)模(mo)擬(ni)腸(chang)液（SIF）的(de)(de)預測能(neng)力，需(xu)要對人(ren)體腸(chang)液（HIF）進行深入(ru)的(de)(de)表征。由于(yu)對進食(shi)后小腸(chang)環境的(de)(de)了解相(xiang)當(dang)有限，11,12,19我們考慮了受(shou)試者間的(de)(de)變異性，研(yan)究(jiu)了進食(shi)后時間功(gong)能(neng)中HIF的(de)(de)組成和特征。此外(wai)，通過給藥(yao)不同脂肪百分比(bi)的(de)(de)營(ying)養飲料來評估不同喂養狀態的(de)(de)效果。

材料和方法

材料

NaCl、冰(bing)醋酸(suan)、氯仿、甲醇(chun)、己烷(wan)和吡(bi)啶購(gou)自默克公司（德(de)國(guo)達姆(mu)施塔特）。硅烷(wan)化劑雙（三甲基硅基）三氟乙(yi)酰胺（BSTFA）從皮爾斯（伊利諾(nuo)伊州(zhou)羅克福德(de)）獲得。脂質(zhi)DL-a-棕(zong)櫚(lv)(lv)酸(suan)、1,2-二棕(zong)櫚(lv)(lv)酰-rac-甘油、甘油基三棕(zong)櫚(lv)(lv)酸(suan)和棕(zong)櫚(lv)(lv)酸(suan)以(yi)及通用脂肪酶抑制劑奧利司他從Sigma-Aldrich（密蘇里州(zhou)圣路易斯）購(gou)買(mai)。使(shi)用Maxima系統（Elga有限公司，英國(guo)High Wycombe Bucks）凈化水。

確保使用Plus1（荷蘭Zwolle的(de)雅(ya)培實驗室B.V.）模(mo)擬(ni)標準膳食。200ml的(de)一(yi)部分(fen)能量(liang)含量(liang)為(wei)300 kcal，其中脂(zhi)質(zhi)、碳水化合物和蛋白(bai)質(zhi)分(fen)別(bie)占29%、54%和17%；滲透壓為(wei)670mosm/kg；pH值為(wei)6.6。ScandishakeMix1（英國利物浦Nutricia）被用來模(mo)擬(ni)富含脂(zhi)肪的(de)膳食。按照(zhao)制造商(shang)的(de)指示(shi)制備(bei)后，一(yi)份的(de)體積為(wei)300 mL，總能量(liang)為(wei)600 kcal，能量(liang)基礎上(shang)由46%的(de)脂(zhi)質(zhi)、46%的(de)碳水化合物和8%的(de)蛋白(bai)質(zhi)組(zu)成；滲透壓為(wei)1031mOsm/kg，pH值為(wei)6.7。

HIF的取樣

腸道液體(ti)的取樣在(zai)(zai)(zai)魯汶大學醫(yi)(yi)院進行，并得到醫(yi)(yi)學倫(lun)理委員會（ML3242）的批準。五名(ming)健康的白人志愿者在(zai)(zai)(zai)給予書面(mian)知情同意后被納入研(yan)究(jiu)(jiu)。在(zai)(zai)(zai)典型(xing)的生(sheng)物(wu)利用度/生(sheng)物(wu)等(deng)效性研(yan)究(jiu)(jiu)中選擇志愿者。三名(ming)男(nan)性和兩名(ming)女(nv)性志愿者，年齡在(zai)(zai)(zai)21至37歲之(zhi)間(jian)，體(ti)重指(zhi)數在(zai)(zai)(zai)22至25 kg/m2之(zhi)間(jian)，參與(yu)了這項研(yan)究(jiu)(jiu)。沒有一名(ming)志愿者有胃腸病(bing)病(bing)史，并且在(zai)(zai)(zai)參與(yu)研(yan)究(jiu)(jiu)前(qian)7天沒有服(fu)藥(yao)。

經(jing)過一(yi)夜(ye)禁(jin)食(shi)(shi)后，通(tong)過口腔(qiang)將一(yi)根(gen)(gen)雙(shuang)腔(qiang)導(dao)管(guan)（塞(sai)勒(le)姆集(ji)(ji)(ji)(ji)水(shui)坑管(guan)14 Ch，外徑4.7 mm，Sherwood Medical，Petit Rechain，比(bi)利時(shi)）引入(ru)十二(er)指(zhi)腸（D2–D3），并(bing)通(tong)過透視(shi)檢查其位置。這種(zhong)雙(shuang)腔(qiang)導(dao)管(guan)允許通(tong)過注射器收集(ji)(ji)(ji)(ji)腸液(ye)(ye)，而(er)不(bu)會在(zai)(zai)胃腸道(dao)(dao)（GI）中(zhong)(zhong)產生負(fu)壓。以前有(you)報道(dao)(dao)稱，經(jing)幽(you)門管(guan)的(de)(de)(de)(de)(de)存(cun)在(zai)(zai)不(bu)影(ying)響胃排空或十二(er)指(zhi)腸胃反流。20在(zai)(zai)三個(ge)非連續的(de)(de)(de)(de)(de)日(ri)子(zi)里，志愿者在(zai)(zai)取樣(yang)前要么喝營養飲料(liao)要么只(zhi)喝規定量(liang)(liang)的(de)(de)(de)(de)(de)水(shui)（250毫(hao)(hao)升）。后者被稱為(wei)(wei)禁(jin)食(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)態。為(wei)(wei)了(le)模(mo)擬(ni)一(yi)頓(dun)標準餐(can)，攝(she)入(ru)400毫(hao)(hao)升的(de)(de)(de)(de)(de)水(shui)和250毫(hao)(hao)升的(de)(de)(de)(de)(de)水(shui)。這種(zhong)情況稱為(wei)(wei)美(mei)聯儲狀(zhuang)(zhuang)態。通(tong)過攝(she)入(ru)300毫(hao)(hao)升斯堪的(de)(de)(de)(de)(de)納(na)克(ke)混合物1，然后攝(she)入(ru)350毫(hao)(hao)升水(shui)，以獲(huo)得650毫(hao)(hao)升的(de)(de)(de)(de)(de)總體(ti)積(ji)，從而(er)獲(huo)得脂(zhi)(zhi)肪(fang)(fang)豐富(fu)的(de)(de)(de)(de)(de)喂養狀(zhuang)(zhuang)態。在(zai)(zai)攝(she)入(ru)營養飲料(liao)和/或水(shui)之(zhi)后，在(zai)(zai)2小(xiao)時(shi)（禁(jin)食(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)態）或5小(xiao)時(shi)（喂食(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)態和富(fu)含(han)(han)脂(zhi)(zhi)肪(fang)(fang)的(de)(de)(de)(de)(de)喂食(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)態）內，每(mei)15分鐘對腸液(ye)(ye)進(jin)(jin)行一(yi)次取樣(yang)（?時(shi)間點(dian)(dian)0），以便(bian)(bian)在(zai)(zai)整個(ge)收集(ji)(ji)(ji)(ji)期后，獲(huo)得21份喂食(shi)(shi)和富(fu)含(han)(han)脂(zhi)(zhi)肪(fang)(fang)的(de)(de)(de)(de)(de)喂食(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)態和9份禁(jin)食(shi)(shi)狀(zhuang)(zhuang)態。在(zai)(zai)含(han)(han)有(you)溶于乙醇的(de)(de)(de)(de)(de)奧利司(si)(si)(si)他的(de)(de)(de)(de)(de)試管(guan)中(zhong)(zhong)收集(ji)(ji)(ji)(ji)腸道(dao)(dao)樣(yang)本，以阻(zu)止體(ti)外進(jin)(jin)一(yi)步的(de)(de)(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)肪(fang)(fang)分解。使用(yong)(yong)1 mM奧利司(si)(si)(si)他在(zai)(zai)乙醇中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)儲備溶液(ye)(ye)使十二(er)指(zhi)腸樣(yang)品(pin)中(zhong)(zhong)奧利司(si)(si)(si)他的(de)(de)(de)(de)(de)最終濃度(du)達到1 mM。該(gai)方案允許對采集(ji)(ji)(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)品(pin)進(jin)(jin)行少量(liang)(liang)稀釋，并(bing)可(ke)忽略添(tian)加乙醇（0.1%，v/v）。如前所(suo)述，該(gai)脂(zhi)(zhi)肪(fang)(fang)酶抑制劑的(de)(de)(de)(de)(de)應用(yong)(yong)濃度(du)為(wei)(wei)IC50（11 nM）的(de)(de)(de)(de)(de)100倍（聯合利華食(shi)(shi)品(pin)與健(jian)康研究所(suo)，弗拉(la)丁根(gen)(gen)，數據未(wei)公布）；樣(yang)品(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)成(cheng)分可(ke)視(shi)為(wei)(wei)體(ti)內成(cheng)分的(de)(de)(de)(de)(de)代表。在(zai)(zai)每(mei)個(ge)采集(ji)(ji)(ji)(ji)時(shi)間點(dian)(dian)之(zhi)后，用(yong)(yong)5–10 mL空氣沖洗導(dao)管(guan)，以清潔導(dao)管(guan)，以便(bian)(bian)隨后進(jin)(jin)行抽吸(xi)。在(zai)(zai)冰上收集(ji)(ji)(ji)(ji)所(suo)有(you)吸(xi)入(ru)的(de)(de)(de)(de)(de)液(ye)(ye)體(ti)，在(zai)(zai)4000 rpm和48℃下離心20分鐘，并(bing)測量(liang)(liang)上清液(ye)(ye)的(de)(de)(de)(de)(de)pH值（瑞士(shi)博納(na)杜茲漢密(mi)爾頓(dun)Slimtrode）。所(suo)有(you)樣(yang)品(pin)在(zai)(zai)308C下儲存(cun)，直至(zhi)進(jin)(jin)一(yi)步分析(xi)。

樣品的處理

為(wei)每位志愿(yuan)者(zhe)成(cheng)對(dui)收集的(de)(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)數(shu)，以獲得30分(fen)(fen)(fen)(fen)鐘的(de)(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)數(shu)，因此對(dui)于大多數(shu)分(fen)(fen)(fen)(fen)數(shu)，有(you)(you)(you)足夠的(de)(de)體積可用于執(zhi)行所(suo)有(you)(you)(you)所(suo)需的(de)(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)析。除(chu)了成(cheng)對(dui)的(de)(de)混(hun)合(he)組(zu)(zu)分(fen)(fen)(fen)(fen)外(wai)，通過添加等(deng)量(liang)的(de)(de)所(suo)有(you)(you)(you)組(zu)(zu)分(fen)(fen)(fen)(fen)，為(wei)每位志愿(yuan)者(zhe)分(fen)(fen)(fen)(fen)別(bie)制備(bei)一(yi)個整體混(hun)合(he)樣(yang)品（進一(yi)步稱(cheng)為(wei)混(hun)合(he)樣(yang)品），受試者(zhe)2和受試者(zhe)5的(de)(de)禁食狀態除(chu)外(wai)（沒(mei)有(you)(you)(you)足夠的(de)(de)體積可用）。

樣品分析

酸堿度

上(shang)清液的pH值（見HIF部分的取樣(yang)）在收集后立即測(ce)量（Hamilton Slimtrode）。

滲透壓

滲透(tou)壓（馬薩諸塞州諾伍德市先進儀器公司；3250型）是(shi)根據測定250毫升樣(yang)品體積中的冰點(dian)降(jiang)低進行(xing)評估的。

表面張力

使(shi)用(yong)Delta-8多通道微張(zhang)力(li)計(ji)（芬(fen)蘭赫爾(er)辛基Kibron公司）在室溫下測定(ding)表(biao)面張(zhang)力(li)。將50微升HIF添加到96孔板的每個孔中。相應的表(biao)面張(zhang)力(li)值由g-screen軟件根據從溶(rong)液中取出(chu)金(jin)屬絲探針時測量表(biao)面張(zhang)力(li)施(shi)加的力(li)自動(dong)生成。

膽汁酸

根據羥基(ji)的數量、位置和(he)方向測定(ding)膽汁(zhi)酸。在堿(jian)性水解和(he)酸化(hua)后，用(yong)二(er)乙醚提(ti)取游(you)離膽汁(zhi)酸，然后進(jin)(jin)行三甲基(ji)硅烷化(hua)以進(jin)(jin)行GC-MS選擇(ze)離子監測分析。21膽汁(zhi)酸的色譜分離在DBXLB毛細管柱上進(jin)(jin)行，恒流模(mo)式為(wei)0.8 mL/min，最終溫度為(wei)2908℃，載(zai)氣為(wei)氦氣。

以氘標記的膽(dan)(dan)(dan)(dan)汁酸(suan)作(zuo)為內標物。總膽(dan)(dan)(dan)(dan)汁酸(suan)濃度測(ce)定(ding)(ding)為單獨測(ce)定(ding)(ding)組（膽(dan)(dan)(dan)(dan)酸(suan)鹽、鵝去氧(yang)膽(dan)(dan)(dan)(dan)酸(suan)鹽、去氧(yang)膽(dan)(dan)(dan)(dan)酸(suan)鹽、熊去氧(yang)膽(dan)(dan)(dan)(dan)酸(suan)鹽）的總和。

總磷脂

使用Wako Chemicals（Neuss，德(de)國(guo)）的試劑盒通過酶法測定總(zong)磷脂(zhi)水(shui)平。22磷脂(zhi)酶D釋放后，膽堿(jian)被膽堿(jian)氧化酶氧化，產生過氧化氫(qing)。隨后，過氧化物酶的作(zuo)用導致(zhi)紅色醌的形(xing)成，可通過分光光度法進行(xing)分析。

脂質含量

按照Armand等(deng)人12的(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)提取(qu)1ml凍干(gan)十二指腸液中的(de)(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)質(zhi)。簡單地(di)說，凍干(gan)樣品(pin)溶(rong)(rong)解在(zai)含有2%冰乙酸(suan)(suan)的(de)(de)(de)(de)0.15m NaCl中。以氯仿/甲醇(chun)（2:1，v/v）為(wei)萃取(qu)溶(rong)(rong)劑。下部氯仿層(ceng)在(zai)氮(dan)氣流下蒸發(fa)至(zhi)干(gan)燥。使用(yong)BSTFA（2%吡啶，v/v）將殘(can)(can)余物硅(gui)烷(wan)化(hua)。在(zai)608C下30分(fen)鐘(zhong)后，將樣品(pin)溶(rong)(rong)解在(zai)己(ji)(ji)烷(wan)中，并(bing)根據Duchateau等(deng)人23所述的(de)(de)(de)(de)技術，通(tong)過GC[Fisons MFC800]和(he)火焰離子化(hua)檢測進行(xing)(xing)分(fen)析。所使用(yong)的(de)(de)(de)(de)色(se)(se)譜(pu)柱(zhu)為(wei)Chrompack CP-Sil5CB-MS色(se)(se)譜(pu)柱(zhu)，帶有失(shi)活(huo)的(de)(de)(de)(de)熔(rong)融石英預柱(zhu)。樣品(pin)被(bei)注入“冷柱(zhu)”，并(bing)以108C/min的(de)(de)(de)(de)升(sheng)溫速率加熱(re)至(zhi)3608C。氫氣被(bei)用(yong)作載氣。注射量為(wei)0.5 mL，總運(yun)行(xing)(xing)時間(jian)為(wei)50 min。根據碳數(shu)（CN）分(fen)離脂(zhi)(zhi)質(zhi)。出于我(wo)們的(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)，對各峰進行(xing)(xing)單獨整合(he)并(bing)組合(he)，以獲得(de)每類(lei)中性脂(zhi)(zhi)質(zhi)的(de)(de)(de)(de)一個(ge)AUC值。CN 8-18、CN 20-28、CN 30-42、CN 44至(zhi)end范(fan)圍(wei)(wei)內的(de)(de)(de)(de)峰值分(fen)別(bie)指定為(wei)游離脂(zhi)(zhi)肪酸(suan)(suan)（FFA）、單甘(gan)(gan)酯（MG）、甘(gan)(gan)油(you)三酯（DG）和(he)甘(gan)(gan)油(you)三酯（TG）。選擇這(zhe)些整合(he)范(fan)圍(wei)(wei)是為(wei)了盡(jin)量減少不同(tong)脂(zhi)(zhi)質(zhi)類(lei)別(bie)之間(jian)的(de)(de)(de)(de)重疊(die)。使用(yong)各自的(de)(de)(de)(de)校準曲線(xian)計算每一類(lei)的(de)(de)(de)(de)量：將棕(zong)櫚(lv)(lv)酸(suan)(suan)、單棕(zong)櫚(lv)(lv)酸(suan)(suan)、雙棕(zong)櫚(lv)(lv)酸(suan)(suan)和(he)三棕(zong)櫚(lv)(lv)酸(suan)(suan)標準品(pin)溶(rong)(rong)解在(zai)己(ji)(ji)烷(wan)中，并(bing)在(zai)氮(dan)氣下蒸發(fa)適當體積，以獲得(de)各自標準品(pin)的(de)(de)(de)(de)已知量。提取(qu)殘(can)(can)余物并(bing)與未(wei)知樣品(pin)進行(xing)(xing)相(xiang)同(tong)的(de)(de)(de)(de)硅(gui)烷(wan)化(hua)。

數據分析

每(mei)個主(zhu)題的所(suo)有(you)(you)配置文件均單(dan)獨呈(cheng)現；只有(you)(you)當(dang)無法吸入液體或(huo)沒有(you)(you)足夠的液體進行分(fen)析時，數據點(dian)才被忽略。個人(ren)中(zhong)值(zhi)是指1名受試者在(zai)1種(zhong)營養狀態下的中(zhong)值(zhi)。綜合考慮所(suo)有(you)(you)五名受試者在(zai)一種(zhong)特定營養狀態下的數據，計(ji)算(suan)(suan)出總(zong)體中(zhong)值(zhi)。使用重復測量ANOVA結(jie)合Tukey多重比較檢(jian)驗或(huo)配對(dui)t檢(jian)驗對(dui)數據集進行比較。根據梯形規則計(ji)算(suan)(suan)喂食(shi)(shi)和富(fu)含脂肪的喂食(shi)(shi)狀態下總(zong)膽汁酸和磷(lin)脂的AUC0–300 min值(zhi)。對(dui)于禁(jin)食(shi)(shi)狀態，AUC0–300分(fen)鐘(zhong)值(zhi)是通過假(jia)設(she)禁(jin)食(shi)(shi)個體中(zhong)值(zhi)是管(guan)腔內值(zhi)的客觀(guan)估計(ji)值(zhi)來估計(ji)的，因(yin)為禁(jin)食(shi)(shi)狀態在(zai)給(gei)藥后/給(gei)藥后300分(fen)鐘(zhong)內保持不變。在(zai)所(suo)有(you)(you)病例(li)中(zhong)，p<0.05時的差異具(ju)有(you)(you)統計(ji)學意義。