材料和方法

材料

美(mei)沙(sha)拉秦（也稱為美(mei)沙(sha)拉秦或(huo)5-ASA，水(shui)溶性1.32 mg/ml，[11]log P 0.98[13]）來(lai)自Sigma-Aldrich（英國多(duo)塞特），潑尼松龍（log P 1.59[14]）來(lai)自塞文生(sheng)物(wu)技術有限公司（英國伍斯特郡）。水(shui)、甲(jia)醇、不(bu)含(han)過氧化氫的四(si)氫呋喃和(he)三(san)氟乙酸(suan)從Fisher Scientific（英國拉夫伯勒）購買，為HPLC級。緩沖(chong)容(rong)量測定用NaOH和(he)HCl的容(rong)量標準從Sigma-Aldrich處(chu)獲得。

胃腸組織

所有程序均由(you)內政部批準(zhun)（PPL編號(hao)70/6421），并(bing)根(gen)據英(ying)國(guo)1986年(nian)《動(dong)物(wu)（科學(xue)程序）法》進行(xing)。豬的(de)(de)胃腸道(dao)是(shi)在(zai)切勒肉類有限(xian)公司（英(ying)國(guo)埃塞克斯(si)）的(de)(de)屠宰場(chang)從(cong)新鮮(xian)殺死(si)的(de)(de)雄性動(dong)物(wu)（大白(bai)(bai)(bai)種和長(chang)白(bai)(bai)(bai)種雜交，n=3,95–110千克，6個月）獲得的(de)(de)。成(cheng)年(nian)新西(xi)蘭大白(bai)(bai)(bai)兔（n=6,2.1-2.3 kg，9-10周(zhou)）和Wistar大鼠(shu)(shu)（n=8220-255 g，8周(zhou)）購自英(ying)國(guo)哈蘭有限(xian)公司（英(ying)國(guo)牛津郡）。所有動(dong)物(wu)都(dou)可以(yi)自由(you)飲(yin)水，并(bing)在(zai)處死(si)前自由(you)進食(shi)：兔子，實驗室(shi)飲(yin)食(shi)5322，添加維生素C（英(ying)國(guo)諾丁漢郡IPS）；豬，Eltabreed Bingle母豬蛋糕-豬用(yong)復合(he)飼料（ABN有限(xian)公司，英(ying)國(guo)彼(bi)得伯(bo)勒）；大鼠(shu)(shu)，Teklad全球18%蛋白(bai)(bai)(bai)質(zhi)嚙齒動(dong)物(wu)飲(yin)食(shi)（哈蘭有限(xian)公司）。

胃腸液

所有(you)測(ce)量(liang)均在(zai)從動物胃(wei)腸(chang)(chang)(chang)液(ye)中(zhong)(zhong)(zhong)獲得的(de)上清液(ye)上進行(xing)。處(chu)死動物，將胃(wei)腸(chang)(chang)(chang)道(dao)分(fen)為(wei)胃(wei)、小(xiao)(xiao)腸(chang)(chang)(chang)、盲腸(chang)(chang)(chang)和結(jie)(jie)腸(chang)(chang)(chang)。如前(qian)所述(shu)(shu)，進一(yi)步細分(fen)小(xiao)(xiao)腸(chang)(chang)(chang)和結(jie)(jie)腸(chang)(chang)(chang)。[6,12]將胃(wei)腸(chang)(chang)(chang)液(ye)轉移到適(shi)當的(de)容器(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)，然后(hou)以(yi)13200 rpm的(de)轉速離心(xin)（德國漢堡Eppendorf AG 5415D離心(xin)機）(～16 110×g rcf）保(bao)存(cun)20分(fen)鐘。上清液(ye)在(zai)–80°C下保(bao)存(cun)，直至分(fen)析。由于(yu)大(da)鼠胃(wei)腸(chang)(chang)(chang)道(dao)的(de)液(ye)體(ti)(ti)容量(liang)有(you)限(xian)，根據解剖位置收集了8只(zhi)大(da)鼠的(de)液(ye)體(ti)(ti)，包(bao)括胃(wei)、小(xiao)(xiao)腸(chang)(chang)(chang)（近端、中(zhong)(zhong)(zhong)部(bu)和遠端）、盲腸(chang)(chang)(chang)和結(jie)(jie)腸(chang)(chang)(chang)。這些液(ye)體(ti)(ti)的(de)緩沖容量(liang)、滲(shen)透壓和表面(mian)張力的(de)特征如下所述(shu)(shu)。還測(ce)定了藥(yao)物在(zai)這些液(ye)體(ti)(ti)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)溶解度。所有(you)測(ce)量(liang)均以(yi)一(yi)式三份(fen)進行(xing)。由于(yu)來自大(da)鼠的(de)液(ye)體(ti)(ti)的(de)匯集性質，所述(shu)(shu)標準(zhun)偏差代(dai)表分(fen)析變異性；然而(er)，對于(yu)兔(tu)子和豬來說，它代(dai)表了動物間的(de)變異性。

滲透壓

使用(yong)數字微滲透計（5R型）（德國柏林Hermann Roebling Messtechnik）測定胃腸液(ye)上清液(ye)的滲透壓(ya)，其(qi)中滲透壓(ya)是利用(yong)冰點(dian)降低理論測量的。每(mei)次測量使用(yong)100μl的體積(ji)。

表面張力

使(shi)用Delta-8管理軟件（版本(ben)3.8）控制的(de)Delta 8張(zhang)力計(ji)（芬蘭埃斯(si)波Kibron公司）測量表面張(zhang)力。使(shi)用DynePlates（為張(zhang)力計(ji)設計(ji)的(de)96孔(kong)板）進行測量，每(mei)個孔(kong)中有50μl上清液(ye)。

pH值和緩沖容量

使(shi)用(yong)配有FC202電極(ji)的pH計（HI99161）測(ce)量(liang)(liang)GI上清液(ye)的pH值(zhi)和(he)緩(huan)沖容量(liang)(liang)，該電極(ji)用(yong)于測(ce)量(liang)(liang)粘性和(he)半固體材料（Hannah Instruments，Bedfordshire，UK）。在pH值(zhi)變化為0.5和(he)1.0單位時，通過向胃腸(chang)液(ye)中(zhong)的300μl上清液(ye)樣品中(zhong)添加小份HCl（用(yong)于腸(chang)液(ye)）或NaOH（用(yong)于胃液(ye)）來測(ce)量(liang)(liang)緩(huan)沖液(ye)容量(liang)(liang)，以達到所需(xu)的pH值(zhi)變化。然(ran)后使(shi)用(yong)以下方程式(shi)計算緩(huan)沖容量(liang)(liang)：

 式中，Ma是酸的(de)摩爾濃度，Va是酸的(de)體積(ji)（單位：毫升(sheng)），Vb是緩沖液(ye)的(de)體積(ji)（單位：毫升(sheng)），ΔpH是pH單位的(de)變化。

溶解度研究

樣品處理和溶解度測量

過量的(de)毒品(pin)(～20毫克強的(de)松龍或～將(jiang)15mg美沙(sha)拉(la)秦）添(tian)加到含有(you)200μl胃腸液(ye)上清(qing)液(ye)的(de)微離心(xin)管（Eppendorf AG）中。然(ran)后將(jiang)樣(yang)品(pin)置于振蕩浴（英國拉(la)夫(fu)伯(bo)勒加倫坎普）中，溫度保(bao)持在(zai)(zai)37°C，轉(zhuan)(zhuan)速(su)(su)為170 rpm。24小時(shi)后，以5000 rpm的(de)轉(zhuan)(zhuan)速(su)(su)離心(xin)樣(yang)品(pin)(～4472×g rcf）在(zai)(zai)37°C下(xia)放置10分鐘(zhong)（離心(xin)機(ji)5804R，Eppendorf AG）。將(jiang)上清(qing)液(ye)依次轉(zhuan)(zhuan)移至(zhi)離心(xin)過濾(lv)管（康(kang)寧(ning)Spin-X，0.22μm醋(cu)酸纖(xian)維素(su)膜(mo)，從英國萊斯特郡費希(xi)爾科學公司獲得），然(ran)后以5000 rpm離心(xin)(～4472×g rcf）在(zai)(zai)37°C下(xia)放置20分鐘(zhong)（離心(xin)機(ji)5804R，Eppendorf AG）。在(zai)(zai)分析之(zhi)前，取下(xia)等份濾(lv)液(ye)（50μl）并用1950μl流動相(xiang)稀釋。該方法之(zhi)前已經過驗證(zheng)[11]，以避免藥物在(zai)(zai)生物液(ye)體(ti)中降解或與過濾(lv)器結合而(er)影響(xiang)溶解度結果。

分析方法

使(shi)用先前報(bao)告(gao)的(de)(de)方法，通過(guo)配備紫外線檢(jian)測(ce)(ce)器（安捷倫(lun)科技1200系列(lie)，加利福尼(ni)亞州圣克拉拉）的(de)(de)反相(xiang)(xiang)高效(xiao)液相(xiang)(xiang)色譜法測(ce)(ce)定(ding)樣(yang)品(pin)(pin)(pin)中(zhong)溶解的(de)(de)潑(po)尼(ni)松(song)龍(long)或美(mei)沙(sha)拉秦(qin)的(de)(de)量。[11]空(kong)白胃腸液樣(yang)品(pin)(pin)(pin)（來自“樣(yang)品(pin)(pin)(pin)處(chu)理和(he)溶解度測(ce)(ce)量”部(bu)分(fen)的(de)(de)無藥(yao)(yao)物(wu)上清液）也以(yi)與測(ce)(ce)試溶解度的(de)(de)樣(yang)品(pin)(pin)(pin)相(xiang)(xiang)同(tong)(tong)的(de)(de)方式(shi)分(fen)析(xi)，以(yi)排除在藥(yao)(yao)物(wu)保(bao)留(liu)(liu)時間出現干擾(rao)峰(feng)的(de)(de)可能(neng)性。空(kong)白樣(yang)品(pin)(pin)(pin)以(yi)與樣(yang)品(pin)(pin)(pin)相(xiang)(xiang)同(tong)(tong)的(de)(de)方式(shi)稀釋，過(guo)濾并隨(sui)后(hou)分(fen)析(xi)。色譜條件(jian)(jian)為(wei)：流(liu)動相(xiang)(xiang)（5%甲醇(chun)，95%水加0.05%三氟乙(yi)酸用于(yu)美(mei)沙(sha)拉秦(qin)，68.8%水，25%四氫呋喃和(he)6.2%甲醇(chun)用于(yu)潑(po)尼(ni)松(song)龍(long)）；反相(xiang)(xiang)柱(zhu)(zhu)，水對稱性C8 5μm 4.6×250mm（美(mei)國馬薩諸塞州米爾福德(de)(de)沃(wo)特斯(si)）用于(yu)潑(po)尼(ni)松(song)龍(long)，5μm 250×4mm（德(de)(de)國達姆施塔(ta)特默(mo)克）用于(yu)美(mei)沙(sha)拉秦(qin)。美(mei)沙(sha)拉秦(qin)和(he)潑(po)尼(ni)松(song)龍(long)分(fen)別在228nm和(he)254 nm處(chu)檢(jian)測(ce)(ce)，保(bao)留(liu)(liu)時間分(fen)別為(wei)7.0和(he)9.9分(fen)鐘。兩種藥(yao)(yao)物(wu)的(de)(de)剩余分(fen)析(xi)條件(jian)(jian)相(xiang)(xiang)同(tong)(tong)（即：20μl注射(she)量，124 bar和(he)40°C柱(zhu)(zhu)溫下的(de)(de)流(liu)速(su)為(wei)1 ml/min）。

統計分析

總(zong)體數據通過單向方差分(fen)析進(jin)行(xing)分(fen)析，然后(hou)使用IBM SPSS Statistics 19（美國伊(yi)(yi)利(li)諾伊(yi)(yi)州(zhou)芝加哥SPSS Inc.）進(jin)行(xing)Tukey事(shi)(shi)后(hou)分(fen)析，置信(xin)區間(jian)為(wei)95%。使用一元一般線(xian)性模(mo)型工具，結合Tukey事(shi)(shi)后(hou)分(fen)析，將(jiang)物種和位置作(zuo)為(wei)固定因(yin)素，事(shi)(shi)后(hou)結果的(de)統(tong)計顯著性為(wei)P<0.05。

Delta-8 動物胃腸道體內中藥物的溶解度的測定——摘要、介紹

Delta-8 動物胃腸道體內中藥物的溶解度的測定——材料和方法

Delta-8 動物胃腸道體內中藥物的溶解度的測定——結果和討論

Delta-8 動物胃腸道體內中藥物的溶解度的測定——結論、致謝！