結果

抗菌肽在脂質單層中的滲透

通過測量(liang)表(biao)面(mian)(mian)壓(ya)(ya)力(li)的增(zeng)量(liang)，觀察(cha)到(dao)抗菌肽在不同初始表(biao)面(mian)(mian)壓(ya)(ya)力(li)（π0）下嵌入到(dao)空(kong)氣/水(shui)界面(mian)(mian)上(shang)的脂質單層(ceng)(ceng)中(zhong)(zhong)(?π）將肽添加到(dao)亞相(xiang)后（Brockman，1999；Verger和Pattus，1976）。Magainin 2在π0>12 mN/m時(shi)容(rong)易插入SOPC單層(ceng)(ceng)（圖1A），而在π0以上(shang)≈35 mN/m時(shi)，其(qi)在膜中(zhong)(zhong)的滲(shen)透(tou)被(bei)消(xiao)除，因(yin)此該值表(biao)示(shi)該肽與SOPC膜相(xiang)互作(zuo)用的臨界包裝壓(ya)(ya)力(li)πc。根據其(qi)凈正電荷4（Matsuzaki，1998），當膜中(zhong)(zhong)酸性磷脂POPG的含量(liang)增(zeng)加時(shi)，magainin 2向(xiang)脂質單層(ceng)(ceng)的滲(shen)透(tou)逐漸增(zeng)強（圖1 A）。因(yin)此，消(xiao)除magainin 2插入單層(ceng)(ceng)的πc值增(zeng)加至~39（XPG=0.1）、43（XPG=0.2）和46 mN/m（XPG=0.4）（圖1c）。相(xiang)反，在SOPC膜中(zhong)(zhong)加入膽固醇（Xchol=0.1）對magainin 2的滲(shen)透(tou)沒有顯著影響（圖1A）。

吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)的(de)π也(ye)顯(xian)著增(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)，顯(xian)示(shi)其插入SOPC單層(ceng)（圖(tu)(tu)1b）。然(ran)而(er)，吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)(duo)青素的(de)膜活性明顯(xian)高于magainin 2，具有πc≈65mN/m，用于SOPC膠(jiao)片。與magainin 2類似，單層(ceng)中(zhong)(zhong)POPG含(han)量的(de)增(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)增(zeng)(zeng)(zeng)強了吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)(duo)青霉素的(de)滲透(tou)，增(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)了?π低(di)于~38 mN/m，與肽(tai)和脂質單層(ceng)之間的(de)靜(jing)電相互作用一(yi)致。然(ran)而(er)，在后一(yi)個(ge)表(biao)面壓力值之上，吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)引起(qi)的(de)π增(zeng)(zeng)(zeng)量被POPG減(jian)(jian)弱。因(yin)此，與magainin 2相反，在存在POPG的(de)情況下，πc減(jian)(jian)小(xiao)（圖(tu)(tu)1c），在XPG=0.4時從~65 mN/m（對于SOPC單層(ceng)）變為(wei)~50 mN/m。在SOPC單層(ceng)中(zhong)(zhong)，吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)增(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)的(de)π也(ye)被膽固醇（X=0.1）增(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)，而(er)πc降低(di)至~54 mN/m。圖(tu)(tu)1所示(shi)的(de)magainin 2和吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)的(de)模式非(fei)常(chang)不同，后一(yi)種(zhong)肽(tai)的(de)明顯(xian)交叉點(dian)為(wei)~38 mN/m。

抗菌肽對雙層脂質動力學的影響

繼上述單層研(yan)究之后(hou)，有(you)興趣(qu)探(tan)索肽(tai)對脂(zhi)質(zhi)動力學的(de)(de)(de)(de)影響(xiang)。這是(shi)通(tong)過(guo)使用(yong)熒光(guang)(guang)光(guang)(guang)譜和(he)(he)不(bu)同(tong)脂(zhi)質(zhi)成分的(de)(de)(de)(de)LUV完成的(de)(de)(de)(de)，記錄(lu)芘標記的(de)(de)(de)(de)熒光(guang)(guang)磷(lin)脂(zhi)類似物PPDPC或PPDPG的(de)(de)(de)(de)發(fa)射(she)光(guang)(guang)譜（均為(wei)X=0.01）。對于(yu)SOPC LUV，添加(jia)(jia)magainin 2導致芘熒光(guang)(guang)顯(xian)著(zhu)猝滅，芘單體和(he)(he)準(zhun)分子發(fa)射(she)強(qiang)度平(ping)行降低(di)，如Im所示（圖(tu)2）。作(zuo)(zuo)為(wei)XPG的(de)(de)(de)(de)一項功能，還(huan)研(yan)究了馬蓋寧(ning)2與脂(zhi)質(zhi)體結合的(de)(de)(de)(de)后(hou)果。當XPG從0.1增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)(jia)到(dao)0.4時(shi)(shi)(shi)，觀(guan)察到(dao)由(you)于(yu)magainin 2在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)398 nm處(chu)逐(zhu)漸增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)強(qiang)的(de)(de)(de)(de)Im（RFIm），而Im的(de)(de)(de)(de)初(chu)始(shi)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)量在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)明(ming)確定義的(de)(de)(de)(de)PG/magainin 2化(hua)學計量比~2、3和(he)(he)5時(shi)(shi)(shi)趨于(yu)平(ping)穩（圖(tu)2 A）。在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)這個初(chu)始(shi)階段之后(hou)，直(zhi)到(dao)給定的(de)(de)(de)(de)化(hua)學計量比，還(huan)有(you)第二(er)個過(guo)程，其斜率也隨著(zhu)XPG的(de)(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)(jia)而增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)(jia)（圖(tu)2b）。在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)XPG=0和(he)(he)0.1時(shi)(shi)(shi)，Magainin 2僅引起Ie/Im的(de)(de)(de)(de)輕微(wei)(wei)變(bian)(bian)化(hua)，而在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)XPG=0.2和(he)(he)0.4時(shi)(shi)(shi)，分別(bie)減少10%和(he)(he)25%是(shi)明(ming)顯(xian)的(de)(de)(de)(de)（圖(tu)3 A）。為(wei)了區分脂(zhi)質(zhi)動力學中(zhong)(zhong)兩種性(xing)質(zhi)不(bu)同(tong)的(de)(de)(de)(de)變(bian)(bian)化(hua)，即(ji)側向遷移(yi)率和(he)(he)微(wei)(wei)結構(gou)域(yu)形成，作(zuo)(zuo)為(wei)上述Ie/Im變(bian)(bian)化(hua)的(de)(de)(de)(de)根本原因，我們(men)還(huan)通(tong)過(guo)測量DPH的(de)(de)(de)(de)熒光(guang)(guang)各(ge)向異性(xing)r來評(ping)估酰(xian)基(ji)鏈順序的(de)(de)(de)(de)變(bian)(bian)化(hua)（圖(tu)3 B）。在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)缺(que)乏酸性(xing)磷(lin)脂(zhi)的(de)(de)(de)(de)情(qing)況(kuang)(kuang)下，Magainin 2幾乎不(bu)會引起r的(de)(de)(de)(de)變(bian)(bian)化(hua)（圖(tu)3B）。然而，隨著(zhu)XPG的(de)(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)(jia)，加(jia)(jia)入(ru)magainin 2后(hou)脂(zhi)質(zhi)堆積和(he)(he)酰(xian)基(ji)鏈順序逐(zhu)漸增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)(jia)（圖(tu)3b），XPG=0.4時(shi)(shi)(shi)，r最大增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)(jia)1.4倍。值得注意的(de)(de)(de)(de)是(shi)，XPG=0.1時(shi)(shi)(shi)Ie/Im沒(mei)有(you)變(bian)(bian)化(hua)以及酰(xian)基(ji)鏈順序的(de)(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)(jia)表(biao)明(ming)PPDPG正在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)發(fa)生微(wei)(wei)觀(guan)富集。有(you)趣(qu)的(de)(de)(de)(de)是(shi)，在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)存在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)膽(dan)固(gu)醇(chun)（Xchol=0.1）的(de)(de)(de)(de)情(qing)況(kuang)(kuang)下，由(you)于(yu)馬蓋寧(ning)2的(de)(de)(de)(de)作(zuo)(zuo)用(yong)，Im和(he)(he)Ie都(dou)顯(xian)著(zhu)降低(di)，Ie/Im的(de)(de)(de)(de)變(bian)(bian)化(hua)不(bu)顯(xian)著(zhu)（圖(tu)2A和(he)(he)3A）。如前所述（van Ginkel et al.，1989），添加(jia)(jia)肽(tai)前r的(de)(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)(jia)（圖(tu)3 B）揭示了通(tong)過(guo)在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)膜中(zhong)(zhong)摻入(ru)膽(dan)固(gu)醇(chun)而增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)強(qiang)的(de)(de)(de)(de)膜順序。然而，在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)膽(dan)固(gu)醇(chun)存在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)情(qing)況(kuang)(kuang)下，magainin 2對r沒(mei)有(you)進一步的(de)(de)(de)(de)影響(xiang)（Xchol=0.1，圖(tu)3b）。

隨后，我(wo)們進(jin)行了(le)與上述相同的(de)(de)(de)測量，但(dan)使用吲哚(duo)(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)。與magainin 2類似(si)，吲哚(duo)(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)也(ye)(ye)導(dao)致(zhi)SOPC LUV的(de)(de)(de)Im和Ie同時(shi)(shi)減(jian)少，如(ru)圖(tu)4a所(suo)示(shi)。然而，與magainin 2相反，當(dang)存在(zai)酸(suan)性(xing)磷(lin)脂POPG時(shi)(shi)，芘(bi)熒光(guang)的(de)(de)(de)猝滅也(ye)(ye)很明顯(xian)。當(dang)肽(tai)/脂摩(mo)爾比(bi)為(wei)1/20時(shi)(shi)，Im按XPG?0.40.20.10順(shun)(shun)序下(xia)降(jiang)。當(dang)XPG=0.4且肽(tai)/脂摩(mo)爾比(bi)>1:12.5時(shi)(shi)，Im值進(jin)一(yi)步降(jiang)低。吲哚(duo)(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)引起的(de)(de)(de)Im最大減(jian)量為(wei)15%（XPG=0）至40%（XPG=0.4）。盡管Im降(jiang)低，但(dan)Ie/Im未顯(xian)示(shi)因吲哚(duo)(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)引起的(de)(de)(de)顯(xian)著(zhu)(zhu)變化（圖(tu)4b）。有(you)趣的(de)(de)(de)是(shi)，在(zai)Xchol=0.1時(shi)(shi)測量到Im的(de)(de)(de)最大下(xia)降(jiang)（圖(tu)4a）。與magainin 2類似(si)，當(dang)吲哚(duo)(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)添(tian)加(jia)到SOPC LUV中時(shi)(shi)，DPH各向(xiang)異性(xing)r保(bao)持不變（圖(tu)5a）。然而，在(zai)含有(you)酸(suan)性(xing)磷(lin)脂的(de)(de)(de)膜(mo)中，吲哚(duo)(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)導(dao)致(zhi)脂質堆積增(zeng)加(jia)和酰基鏈(lian)順(shun)(shun)序增(zeng)加(jia)，明顯(xian)表(biao)現為(wei)r增(zeng)加(jia)（圖(tu)5a）。此外，r的(de)(de)(de)增(zeng)加(jia)取決(jue)于(yu)XPG，隨著(zhu)(zhu)雙(shuang)層中酸(suan)性(xing)磷(lin)脂含量的(de)(de)(de)增(zeng)加(jia)而增(zeng)加(jia)（圖(tu)5b）。相應(ying)的(de)(de)(de)最大增(zeng)幅(fu)為(wei)1.05倍至1.39倍。在(zai)膽固醇(chun)存在(zai)的(de)(de)(de)情況下(xia)，也(ye)(ye)觀察到吲哚(duo)(duo)(duo)肽(tai)引起的(de)(de)(de)膜(mo)酰基鏈(lian)順(shun)(shun)序的(de)(de)(de)增(zeng)加(jia)，使r增(zeng)加(jia)1.06倍（圖(tu)5a）。

抗菌肽對膜拓撲結構的影響

由于上述magainin 2和(he)(he)(he)吲哚西啶對單層和(he)(he)(he)LUV具有(you)明顯(xian)(xian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)成分(fen)(fen)(fen)依賴性(xing)作(zuo)(zuo)用(yong)(yong)，因此(ci)有(you)興趣使用(yong)(yong)巨(ju)(ju)(ju)(ju)(ju)型脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)比較(jiao)這(zhe)些(xie)(xie)肽對宏觀(guan)膜(mo)(mo)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)三維拓(tuo)撲(pu)(pu)結(jie)構的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)影響，無論是否含有(you)PG，都可(ke)(ke)以在(zai)(zai)(zai)交流(liu)電場中(zhong)(zhong)形(xing)成由SOPC組(zu)成的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)巨(ju)(ju)(ju)(ju)(ju)大(da)(da)(da)脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)。即使暴露于大(da)(da)(da)量肽（~2 fmol，~4 pl=200次重復(fu)(fu)注射(she)(she)，數(shu)據未顯(xian)(xian)示(shi)），SOPC膜(mo)(mo)也(ye)(ye)不(bu)受magainin 2的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)影響。同樣，由SOPC和(he)(he)(he)膽固醇（Xchol=0.1）組(zu)成的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)巨(ju)(ju)(ju)(ju)(ju)大(da)(da)(da)脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)也(ye)(ye)不(bu)受此(ci)量的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)馬蓋寧2的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)影響（數(shu)據未顯(xian)(xian)示(shi)）。然而，在(zai)(zai)(zai)存在(zai)(zai)(zai)POPG（XPG=0.1）的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)情(qing)況下，已經~0.01 fmol（單次~20 fl注射(she)(she)）的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)magainin 2應用(yong)(yong)于巨(ju)(ju)(ju)(ju)(ju)大(da)(da)(da)囊(nang)(nang)泡(pao)表(biao)(biao)面(mian)，顯(xian)(xian)著(zhu)影響巨(ju)(ju)(ju)(ju)(ju)大(da)(da)(da)脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)膜(mo)(mo)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)拓(tuo)撲(pu)(pu)結(jie)構（圖6 B）。更具體(ti)(ti)地說(shuo)，在(zai)(zai)(zai)~1分(fen)(fen)(fen)鐘內(nei)(nei)(nei)，小(xiao)(xiao)顆(ke)粒（θ≈0.9米(mi)）出現在(zai)(zai)(zai)巨(ju)(ju)(ju)(ju)(ju)大(da)(da)(da)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)囊(nang)(nang)泡(pao)內(nei)(nei)(nei)。隨(sui)后(hou)注射(she)(she)高達(da)~0.1 fmol（約(yue)(yue)200 fl）的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)magainin 2不(bu)會引(yin)(yin)起進(jin)(jin)(jin)一(yi)(yi)步(bu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)可(ke)(ke)見變(bian)(bian)化。在(zai)(zai)(zai)總(zong)共(gong)添加約(yue)(yue)0.2 fmol的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽后(hou)，膜(mo)(mo)開始起伏，形(xing)成致(zhi)密(mi)顆(ke)粒（θ≈4 m）在(zai)(zai)(zai)巨(ju)(ju)(ju)(ju)(ju)大(da)(da)(da)脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)內(nei)(nei)(nei)可(ke)(ke)見（圖6 C）。在(zai)(zai)(zai)~5分(fen)(fen)(fen)鐘內(nei)(nei)(nei)，幾(ji)個小(xiao)(xiao)顆(ke)粒（θ≈0.9 m）出現在(zai)(zai)(zai)巨(ju)(ju)(ju)(ju)(ju)大(da)(da)(da)脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)膜(mo)(mo)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)內(nei)(nei)(nei)表(biao)(biao)面(mian)（圖6 D）。隨(sui)后(hou)，大(da)(da)(da)多數(shu)小(xiao)(xiao)顆(ke)粒進(jin)(jin)(jin)入巨(ju)(ju)(ju)(ju)(ju)大(da)(da)(da)囊(nang)(nang)泡(pao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)內(nei)(nei)(nei)腔(qiang)。這(zhe)些(xie)(xie)內(nei)(nei)(nei)吞小(xiao)(xiao)泡(pao)似乎(hu)在(zai)(zai)(zai)巨(ju)(ju)(ju)(ju)(ju)大(da)(da)(da)脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)內(nei)(nei)(nei)自由移動(dong)，在(zai)(zai)(zai)隨(sui)后(hou)30分(fen)(fen)(fen)鐘的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)觀(guan)察中(zhong)(zhong)沒有(you)進(jin)(jin)(jin)一(yi)(yi)步(bu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)變(bian)(bian)化。進(jin)(jin)(jin)一(yi)(yi)步(bu)注射(she)(she)magainin 2，提供總(zong)共(gong)0.3 fmol的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽，引(yin)(yin)起類似內(nei)(nei)(nei)吞作(zuo)(zuo)用(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)過(guo)程(cheng)，出現直(zhi)徑約(yue)(yue)8 m的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)致(zhi)密(mi)顆(ke)粒（圖6 E）。約(yue)(yue)10分(fen)(fen)(fen)鐘后(hou)，巨(ju)(ju)(ju)(ju)(ju)大(da)(da)(da)脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)內(nei)(nei)(nei)約(yue)(yue)0.9-m顆(ke)粒的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)數(shu)量繼續(xu)增(zeng)加。偶爾，這(zhe)些(xie)(xie)顆(ke)粒也(ye)(ye)出現在(zai)(zai)(zai)巨(ju)(ju)(ju)(ju)(ju)大(da)(da)(da)囊(nang)(nang)泡(pao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)外表(biao)(biao)面(mian)，并(bing)釋(shi)放到外部緩沖液中(zhong)(zhong)（圖6 E）。隨(sui)后(hou)添加magainin 2（~0.7 fmol）使膜(mo)(mo)不(bu)穩(wen)定并(bing)誘導進(jin)(jin)(jin)一(yi)(yi)步(bu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)囊(nang)(nang)泡(pao)形(xing)成（圖6 F）。這(zhe)些(xie)(xie)內(nei)(nei)(nei)吞囊(nang)(nang)泡(pao)在(zai)(zai)(zai)巨(ju)(ju)(ju)(ju)(ju)大(da)(da)(da)脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)內(nei)(nei)(nei)彼(bi)此(ci)分(fen)(fen)(fen)離，巨(ju)(ju)(ju)(ju)(ju)大(da)(da)(da)囊(nang)(nang)泡(pao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)大(da)(da)(da)小(xiao)(xiao)明顯(xian)(xian)減小(xiao)(xiao)（圖6f）。最終，在(zai)(zai)(zai)進(jin)(jin)(jin)一(yi)(yi)步(bu)添加magainin 2（高達(da)~1.5 fmol）后(hou)，巨(ju)(ju)(ju)(ju)(ju)大(da)(da)(da)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)膜(mo)(mo)崩塌。上述形(xing)態學變(bian)(bian)化具有(you)高度(du)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)可(ke)(ke)重復(fu)(fu)性(xing)。

隨(sui)(sui)后(hou)(hou)，我們研(yan)究了吲(yin)哚西丁(ding)對由SOPC及其與POPG（XPG=0.1）的(de)(de)混合物組成的(de)(de)巨(ju)(ju)(ju)大(da)(da)脂(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)的(de)(de)影響。對于(yu)SOPC巨(ju)(ju)(ju)型脂(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)，唯一明顯的(de)(de)變化(hua)是在(zai)(zai)其表(biao)(biao)面應用~2 fmol（~200次注射）吲(yin)哚西丁(ding)后(hou)(hou)出(chu)(chu)現輕微(wei)收(shou)縮（數據未顯示）。然(ran)而，當囊(nang)泡含(han)有(you)POPG（X=0.1）時，吲(yin)哚西丁(ding)（~0.5 fmol）誘導類似(si)內吞作用的(de)(de)過程（圖(tu)7），巨(ju)(ju)(ju)大(da)(da)脂(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)內出(chu)(chu)現小(xiao)(xiao)顆粒(li)（~0.9 m）。添加(jia)約(yue)0.5 fmol吲(yin)哚西丁(ding)（50次注射）后(hou)(hou)，暴露于(yu)吲(yin)哚西丁(ding)的(de)(de)巨(ju)(ju)(ju)大(da)(da)脂(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)表(biao)(biao)面區域(yu)變暗，折射率(lv)發生顯著變化(hua)，表(biao)(biao)明形成緊密堆積(ji)的(de)(de)三維結構，僅部分(fen)保(bao)留在(zai)(zai)焦(jiao)平面內（圖(tu)7b）。小(xiao)(xiao)粒(li)子（θ）≈在(zai)(zai)上述聚集體(ti)形成后(hou)(hou)約(yue)1分(fen)鐘內，巨(ju)(ju)(ju)大(da)(da)脂(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)內出(chu)(chu)現0.9 m（圖(tu)7 C）。隨(sui)(sui)后(hou)(hou)再添加(jia)0.1 fmol吲(yin)哚西啶后(hou)(hou)，膜表(biao)(biao)面的(de)(de)聚集物仍然(ran)存在(zai)(zai)，更多的(de)(de)小(xiao)(xiao)直(zhi)徑(jing)顆粒(li)出(chu)(chu)現在(zai)(zai)巨(ju)(ju)(ju)大(da)(da)的(de)(de)囊(nang)泡內（圖(tu)7，DF）。這種類似(si)內吞作用的(de)(de)過程在(zai)(zai)隨(sui)(sui)后(hou)(hou)添加(jia)吲(yin)哚西丁(ding)的(de)(de)情況下重復，大(da)(da)量小(xiao)(xiao)顆粒(li)逐(zhu)漸積(ji)聚在(zai)(zai)巨(ju)(ju)(ju)大(da)(da)脂(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)內，并(bing)且巨(ju)(ju)(ju)大(da)(da)脂(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)的(de)(de)大(da)(da)小(xiao)(xiao)略有(you)減(jian)小(xiao)(xiao)。

隨后，我們(men)研究了吲(yin)(yin)哚(duo)西(xi)(xi)丁(ding)對由SOPC和膽固醇(chun)組成(cheng)的(de)(de)巨(ju)(ju)大(da)(da)脂(zhi)質體(ti)（Xchol?0.1）的(de)(de)影響。吲(yin)(yin)哚(duo)西(xi)(xi)丁(ding)在(zai)膽固醇(chun)存(cun)在(zai)的(de)(de)情(qing)(qing)況下也(ye)會引起巨(ju)(ju)大(da)(da)脂(zhi)質體(ti)的(de)(de)起泡。形成(cheng)的(de)(de)內吞小泡在(zai)巨(ju)(ju)大(da)(da)小泡的(de)(de)表(biao)面上深度(du)聚集(ji)（圖8b）。具體(ti)地說，在(zai)添(tian)加(jia)約0.2 fmol吲(yin)(yin)哚(duo)西(xi)(xi)啶（~400 fl，20次注射，圖8 B）后約5 s內，巨(ju)(ju)大(da)(da)脂(zhi)質體(ti)表(biao)面出現一簇小顆粒(li)。隨后，聚集(ji)物(wu)轉移(yi)到巨(ju)(ju)大(da)(da)的(de)(de)脂(zhi)質體(ti)中，同(tong)時也(ye)有少量(liang)內吞顆粒(li)（θ≈0.9米）處可見。進(jin)一步(bu)添(tian)加(jia)吲(yin)(yin)哚(duo)西(xi)(xi)丁(ding)會增加(jia)這些(xie)顆粒(li)的(de)(de)數量(liang)，并導致巨(ju)(ju)大(da)(da)脂(zhi)質體(ti)收縮。然而(er)，即使在(zai)暴露于~2 fmol吲(yin)(yin)哚(duo)西(xi)(xi)丁(ding)（200次注射，數據未顯示）的(de)(de)情(qing)(qing)況下，膜大(da)(da)體(ti)上仍保持完整。

討論

馬蓋寧2和吲哚青霉素的膜活性

單(dan)(dan)層(ceng)實驗顯示，magainin 2和吲(yin)(yin)哚(duo)西(xi)(xi)啶具有(you)(you)高度(du)(du)的膜(mo)活性（圖(tu)1），在空氣(qi)/水界(jie)面(mian)上的脂質膜(mo)下(xia)注(zhu)射后(hou)，表面(mian)壓(ya)力(li)(li)顯著增(zeng)(zeng)加(jia)。根據(ju)(ju)膜(mo)的組成，發(fa)現了與(yu)(yu)表面(mian)壓(ya)力(li)(li)πc對應的臨界(jie)堆積(ji)密度(du)(du)，超過該密度(du)(du)，這些肽不(bu)(bu)再(zai)與(yu)(yu)單(dan)(dan)層(ceng)相(xiang)(xiang)互作用(yong)，從而(er)導致π的增(zeng)(zeng)加(jia)（Verger和Pattus，1976）。盡管這兩種肽插入兩性離(li)子(zi)(zi)磷脂酰膽堿單(dan)(dan)分子(zi)(zi)膜(mo)，但它(ta)們優先與(yu)(yu)酸性磷脂相(xiang)(xiang)互作用(yong)，與(yu)(yu)其(qi)凈(jing)陽(yang)離(li)子(zi)(zi)電(dian)荷保(bao)持一(yi)致（Matsuzaki等(deng)人(ren)，1991、1993、1995a、1998；Ladokhin等(deng)人(ren)，1997）。然而(er)，PG對其(qi)穿(chuan)(chuan)透(tou)力(li)(li)的影響(xiang)明顯不(bu)(bu)同，吲(yin)(yin)哚(duo)西(xi)(xi)丁(ding)在~38 mN/m的表面(mian)壓(ya)力(li)(li)下(xia)有(you)(you)一(yi)個交叉(cha)點，吲(yin)(yin)哚(duo)西(xi)(xi)丁(ding)的斜(xie)率為?存在PG時(shi)，π與(yu)(yu)π0的比值變(bian)得更(geng)陡（圖(tu)1）。相(xiang)(xiang)比之下(xia)，斜(xie)坡??與(yu)(yu)π0相(xiang)(xiang)比，magainin 2的穿(chuan)(chuan)透(tou)力(li)(li)未(wei)因(yin)(yin)PG的存在而(er)改變(bian)（圖(tu)1A）。我(wo)們的數(shu)據(ju)(ju)表明，magainin 2更(geng)表面(mian)地附著于單(dan)(dan)層(ceng)，其(qi)穿(chuan)(chuan)透(tou)深(shen)度(du)(du)增(zeng)(zeng)加(jia)PG，并隨著表面(mian)壓(ya)力(li)(li)的增(zeng)(zeng)加(jia)而(er)逐漸減小，其(qi)長軸相(xiang)(xiang)對于層(ceng)平(ping)(ping)面(mian)的角度(du)(du)在不(bu)(bu)同壓(ya)力(li)(li)下(xia)保(bao)持相(xiang)(xiang)對不(bu)(bu)變(bian)。上述(shu)magainin 2與(yu)(yu)脂質單(dan)(dan)分子(zi)(zi)膜(mo)的相(xiang)(xiang)互作用(yong)模式可兼(jian)容(rong)1）其(qi)主要(yao)為=-螺(luo)旋構象，PG增(zeng)(zeng)加(jia)=-螺(luo)旋度(du)(du)（Wieprecht et al.，1997），和2）該肽在其(qi)長軸平(ping)(ping)行于層(ceng)平(ping)(ping)面(mian)的情況下(xia)向脂質雙層(ceng)的淺層(ceng)滲透(tou)（Bechinger等(deng)人(ren)，1993年；Matsuzaki等(deng)人(ren)，1994年）。在π>πc時(shi)，magainin 2仍可能與(yu)(yu)單(dan)(dan)層(ceng)中的PG靜電(dian)結合，盡管沒有(you)(you)穿(chuan)(chuan)透(tou)膜(mo)，因(yin)(yin)此不(bu)(bu)會導致π增(zeng)(zeng)加(jia)。最(zui)后(hou)，我(wo)們的數(shu)據(ju)(ju)還(huan)表明，與(yu)(yu)雙層(ceng)不(bu)(bu)同，magainin 2不(bu)(bu)會在脂質單(dan)(dan)層(ceng)中采用(yong)垂直方向（即其(qi)=-螺(luo)旋的長軸垂直于層(ceng)平(ping)(ping)面(mian)）。

對于(yu)測試的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)所有(you)單層(ceng)組成(cheng)(cheng)，吲哚(duo)(duo)青(qing)霉素的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)πc值(zhi)超過了馬蓋寧2的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)測量值(zhi)（圖1 c），表明該(gai)肽(tai)在(zai)(zai)(zai)(zai)酰基(ji)鏈之(zhi)間有(you)效插入和插層(ceng)。吲哚(duo)(duo)西(xi)丁(ding)(ding)在(zai)(zai)(zai)(zai)~38 mN/m的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)交(jiao)叉點值(zhi)得關(guan)注。在(zai)(zai)(zai)(zai)后一個表面(mian)(mian)壓(ya)力(li)(li)之(zhi)下，表面(mian)(mian)壓(ya)力(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)增(zeng)量??在(zai)(zai)(zai)(zai)PG存在(zai)(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)情況下，吲哚(duo)(duo)西(xi)丁(ding)(ding)引起的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)反應增(zeng)強，而(er)在(zai)(zai)(zai)(zai)較高的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)初始(shi)脂(zhi)質(zhi)堆(dui)積密度下觀察到相反的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)反應。有(you)趣的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是(shi)，不(bu)管脂(zhi)質(zhi)成(cheng)(cheng)分（即PG的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)存在(zai)(zai)(zai)(zai)）如何(he)，交(jiao)叉點幾乎保持不(bu)變，因此表明它可以完全(quan)由表面(mian)(mian)壓(ya)力(li)(li)決定，而(er)不(bu)管靜(jing)電相互作(zuo)用如何(he)。一種(zhong)可能的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)機制是(shi)，在(zai)(zai)(zai)(zai)π0>38 mN/m時，吲哚(duo)(duo)西(xi)丁(ding)(ding)以壓(ya)力(li)(li)依(yi)賴(lai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方式改變其在(zai)(zai)(zai)(zai)單層(ceng)中的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)取(qu)向，可能是(shi)從其長軸相對于(yu)層(ceng)平面(mian)(mian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)平行到垂(chui)直取(qu)向（圖9，B和C），從而(er)減少面(mian)(mian)積/肽(tai)并減少?π.此外，一些靜(jing)電結合(he)吲哚(duo)(duo)肽(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)PG分子(zi)也可能與單層(ceng)中的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)磷脂(zhi)方向不(bu)同。換句話說(shuo)，吲哚(duo)(duo)西(xi)丁(ding)(ding)與其相關(guan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)PG將形(xing)成(cheng)(cheng)一種(zhong)超分子(zi)復(fu)合(he)物(wu)，其取(qu)向將取(qu)決于(yu)壓(ya)力(li)(li)。這在(zai)(zai)(zai)(zai)圖9中示(shi)意(yi)性地示(shi)出。重(zhong)要的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是(shi)，所提(ti)(ti)出的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽(tai)連接磷脂(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)重(zhong)新定向將與最近(jin)提(ti)(ti)出的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)模(mo)(mo)型(xing)兼(jian)容，在(zai)(zai)(zai)(zai)該(gai)模(mo)(mo)型(xing)中，穿(chuan)過雙層(ceng)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)孔表面(mian)(mian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)一部(bu)分將由脂(zhi)質(zhi)頭基(ji)構成(cheng)(cheng)（Ludtke et al.，1996）。

magainin 2和吲哚西啶對雙層脂質動力學的影響

雖然熒光光譜顯(xian)示，馬蓋寧(ning)2和(he)吲哚(duo)西啶對(dui)脂質動(dong)力(li)學(xue)的(de)影響存在(zai)(zai)(zai)明顯(xian)差異，但也存在(zai)(zai)(zai)一些明顯(xian)的(de)相似之處。因此，DPH各向(xiang)異性r的(de)增(zeng)(zeng)加(jia)(jia)表明，在(zai)(zai)(zai)存在(zai)(zai)(zai)酸(suan)性磷(lin)脂的(de)情況(kuang)下(xia)，這兩種肽都(dou)會導致酰基鏈順序(xu)的(de)增(zeng)(zeng)加(jia)(jia)，這種影響的(de)程度(du)隨著XPG的(de)增(zeng)(zeng)加(jia)(jia)而增(zeng)(zeng)加(jia)(jia)（圖3b和(he)5b）。同(tong)樣，在(zai)(zai)(zai)膽固醇(chun)存在(zai)(zai)(zai)的(de)情況(kuang)下(xia)，兩種肽對(dui)芘熒光的(de)有效(xiao)猝滅也很明顯(xian)（圖2a和(he)4a）。這可(ke)能(neng)與膽固醇(chun)的(de)OH基團和(he)馬蓋寧(ning)的(de)E19殘(can)基之間的(de)相互作用有關（Tytler等人，1995年），該肽在(zai)(zai)(zai)膜中(zhong)具(ju)有跨膜取向(xiang)。當(dang)Xchol=0.1時(shi)，r值(zhi)的(de)增(zeng)(zeng)加(jia)(jia)是由于吲哚(duo)西丁所(suo)致，而馬加(jia)(jia)寧(ning)則無(wu)影響。這表明，在(zai)(zai)(zai)膽固醇(chun)存在(zai)(zai)(zai)的(de)情況(kuang)下(xia)，吲哚(duo)肽可(ke)能(neng)采用跨雙層(ceng)取向(xiang)，其長軸垂直于雙層(ceng)平面。

 這兩種抗菌肽(tai)對芘標記的(de)磷脂類似物的(de)猝滅(mie)機制(zhi)令人感興趣。可(ke)(ke)(ke)(ke)能(neng)涉及π-陽離子相互(hu)作用(yong)（Dougherty，1996），后(hou)者由肽(tai)的(de)堿性(xing)(xing)殘基表(biao)示。吲哚(duo)西丁具有(you)較高的(de)Trp含量（39%），可(ke)(ke)(ke)(ke)促進其分配到脂質(zhi)(zhi)雙層（Wimley和(he)White，1996）。因(yin)此，芘和(he)色氨酸之間的(de)π-相互(hu)作用(yong)也是可(ke)(ke)(ke)(ke)能(neng)的(de)。已經證明(ming)，色氨酸可(ke)(ke)(ke)(ke)以淬滅(mie)膠(jiao)束溶液(ye)中各種芘衍生物的(de)熒(ying)光發(fa)射（Encinas和(he)Lissi，1986；Altamirano等人，1998）。另一(yi)種可(ke)(ke)(ke)(ke)能(neng)性(xing)(xing)是鏈(lian)反(fan)轉（Holopainen et al.，1999），通過肽(tai)與脂質(zhi)(zhi)雙層結合，導致芘部分調節到更(geng)極(ji)性(xing)(xing)的(de)環境中，從(cong)而(er)增加熒(ying)光團微環境的(de)極(ji)性(xing)(xing)，并導致量子產率降低。

除上(shang)述相(xiang)似性(xing)(xing)外，當使用芘標記的(de)(de)(de)(de)(de)(de)脂(zhi)質類似物研(yan)究(jiu)酸性(xing)(xing)磷(lin)脂(zhi)對(dui)脂(zhi)質動力學的(de)(de)(de)(de)(de)(de)影(ying)響(xiang)時，兩(liang)(liang)種(zhong)肽之間也(ye)存在(zai)明(ming)(ming)顯差(cha)異。Magainin 2導(dao)致兩(liang)(liang)性(xing)(xing)磷(lin)脂(zhi)組成的(de)(de)(de)(de)(de)(de)LUV的(de)(de)(de)(de)(de)(de)芘發射顯著猝(cu)(cu)滅(mie)（圖2A）。然(ran)而，在(zai)PG存在(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)情(qing)況下，芘的(de)(de)(de)(de)(de)(de)單體強度增(zeng)加，XPG逐(zhu)漸(jian)增(zeng)加了這種(zhong)效(xiao)應(ying)(ying)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)幅度（圖2A）。圓二色性(xing)(xing)、拉曼光譜、傅里葉(xie)變換紅外光譜和固態核磁共振研(yan)究(jiu)表明(ming)(ming)，馬蓋寧在(zai)與(yu)脂(zhi)質雙(shuang)層結合時采用螺(luo)旋構象（Matsuzaki等(deng)(deng)人(ren)，1989年(nian)、1991年(nian)；Williams等(deng)(deng)人(ren)，1990年(nian)；Jackson等(deng)(deng)人(ren)，1992年(nian)；Bechinger等(deng)(deng)人(ren)，1993年(nian)；Wieprecht等(deng)(deng)人(ren)，1997年(nian)；Hirsh等(deng)(deng)人(ren)，1996年(nian)）。magainin 2對(dui)兩(liang)(liang)種(zhong)膜的(de)(de)(de)(de)(de)(de)這些不同影(ying)響(xiang)可能是由于(yu)(yu)1）通(tong)過與(yu)肽的(de)(de)(de)(de)(de)(de)帶(dai)正電(dian)基團(tuan)（例如賴氨(an)酸的(de)(de)(de)(de)(de)(de)?氨(an)基）直接(jie)接(jie)觸使芘熒(ying)光猝(cu)(cu)滅(mie)，或2）插入雙(shuang)層的(de)(de)(de)(de)(de)(de)=-螺(luo)旋肽改變熒(ying)光團(tuan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)微環境，與(yu)層平(ping)面平(ping)行，如上(shang)所(suo)述。然(ran)而，在(zai)PG存在(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)情(qing)況下，肽的(de)(de)(de)(de)(de)(de)正電(dian)荷(he)應(ying)(ying)在(zai)與(yu)酸性(xing)(xing)磷(lin)脂(zhi)形成靜(jing)電(dian)復合物時被中和，從(cong)而減少由于(yu)(yu)π-陽(yang)離子相(xiang)互作用導(dao)致的(de)(de)(de)(de)(de)(de)芘熒(ying)光猝(cu)(cu)滅(mie)。

有(you)趣(qu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是，在(zai)存在(zai)酸性(xing)磷脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)情況下，肌動(dong)蛋(dan)白/脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)摩(mo)(mo)爾(er)比（在(zai)該摩(mo)(mo)爾(er)比下，肌動(dong)蛋(dan)白的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)初(chu)始增(zeng)量(liang)趨于(yu)(yu)穩(wen)定）分別(bie)為(wei)1:21、1:16和(he)(he)1:12.5，對應(ying)于(yu)(yu)XPG=0.1、0.2和(he)(he)0.4（圖(tu)2A），分別(bie)產生1:2、1:3和(he)(he)1:5的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肌動(dong)蛋(dan)白/磷脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)化(hua)學計(ji)量(liang)比。同時，DPH的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)初(chu)始r增(zeng)量(liang)在(zai)magainin/脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)摩(mo)(mo)爾(er)比為(wei)~1:30、1:12和(he)(he)1:5時趨于(yu)(yu)平穩(wen)（XPG分別(bie)為(wei)0.1、0.2和(he)(he)0.4），對應(ying)于(yu)(yu)大約1:3、1:2.5和(he)(he)1:2的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)magainin/PG化(hua)學計(ji)量(liang)比（圖(tu)3）。據(ju)報道，在(zai)這(zhe)些(xie)肽/脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)摩(mo)(mo)爾(er)比下，magainin可插入含酸性(xing)磷脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)膜中(zhong)（Ludtke等人(ren)，1994年(nian)）。此外，已經證明，雙分子層中(zhong)magainin的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)=-螺旋的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方向取(qu)決于(yu)(yu)肽與脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)摩(mo)(mo)爾(er)比，在(zai)上(shang)述化(hua)學計(ji)量(liang)比下，螺旋應(ying)垂直于(yu)(yu)膜表面插入，在(zai)含PG的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)膜中(zhong)形成孔（Ludtke等人(ren)，1996）。這(zhe)些(xie)孔不僅由(you)兩親螺旋的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)極性(xing)面組成，而且(qie)還由(you)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)極性(xing)頭基(ji)組成，內(nei)外單層通過這(zhe)些(xie)孔襯脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)是連續(xu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。膜中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)這(zhe)種結(jie)構可能會(hui)降(jiang)(jiang)低探針芘部分微(wei)環境的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)極性(xing)，從而提高(gao)其量(liang)子產率。有(you)趣(qu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是，當XPG>0.1時，magainin 2逐漸降(jiang)(jiang)低Ie/Im值（圖(tu)3 A），這(zhe)與增(zeng)強的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)酰基(ji)鏈順序減少(shao)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)側向擴(kuo)散(san)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)速率一致(zhi)。然而，由(you)于(yu)(yu)magainin 2已經在(zai)XPG=0.1時增(zeng)加了(le)r，Ie/Im沒(mei)有(you)變化(hua)，我們可以得出結(jie)論(lun)，PPDPG探針向微(wei)區富集以及其橫向擴(kuo)散(san)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)減少(shao)正(zheng)在(zai)發生。

與(yu)(yu)(yu)(yu)magainin 2類似(si)，吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)青霉素與(yu)(yu)(yu)(yu)陰離(li)(li)子(zi)(zi)和兩性(xing)離(li)(li)子(zi)(zi)囊泡的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)膜(mo)(mo)結(jie)合非常不(bu)同(tong)（圖1b、4和5），與(yu)(yu)(yu)(yu)先前的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)平衡透析研究一致(zhi)(zhi)（Ladokhin et al.，1997）。雖然芘熒(ying)光的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)猝(cu)(cu)滅(mie)顯示吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)肽(tai)被(bei)分(fen)(fen)(fen)配(pei)到(dao)(dao)SOPC雙(shuang)層(ceng)中(zhong)，但對膜(mo)(mo)酰基鏈(lian)(lian)(lian)順(shun)序幾乎沒有影響（圖5）。相反(fan)，吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)西(xi)(xi)啶與(yu)(yu)(yu)(yu)陰離(li)(li)子(zi)(zi)膜(mo)(mo)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)相互作用導(dao)(dao)致(zhi)(zhi)脂(zhi)酰鏈(lian)(lian)(lian)順(shun)序增(zeng)加(jia)，明顯表現為DPH熒(ying)光各向異性(xing)增(zeng)加(jia)，并對XPG呈S形(xing)依賴（圖5）。與(yu)(yu)(yu)(yu)magainin 2相反(fan)，吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)(ding)導(dao)(dao)致(zhi)(zhi)芘單體和準(zhun)分(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)發射強度(du)(du)顯著平行(xing)降低(di)，與(yu)(yu)(yu)(yu)脂(zhi)質成分(fen)(fen)(fen)無關，Ie/Im變化較(jiao)小(xiao)(xiao)（圖4）。相應地，吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)(ding)誘導(dao)(dao)酸性(xing)PG富集(ji)到(dao)(dao)微(wei)區。有趣的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是，在吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)(ding)/脂(zhi)質摩爾(er)比(bi)為1:20以(yi)(yi)下，芘Im的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)減(jian)少(shao)(shao)順(shun)序為XPG=0.40.20.10（圖4a），而(er)(er)在吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)(ding)/脂(zhi)質摩爾(er)比(bi)為1:10時(shi)，Im的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)減(jian)少(shao)(shao)對XPG的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)依賴性(xing)相反(fan)。這種(zhong)變化的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)可能機(ji)制如下。在低(di)肽(tai)/脂(zhi)摩爾(er)比(bi)時(shi)，吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)(ding)似(si)乎被(bei)調(diao)節到(dao)(dao)雙(shuang)層(ceng)界面(mian)（Ladokhin等(deng)人(ren)，1997），芘標記鏈(lian)(lian)(lian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)鏈(lian)(lian)(lian)反(fan)轉（Holopainen等(deng)人(ren)，1999）使該部分(fen)(fen)(fen)更接近雙(shuang)層(ceng)表面(mian)，從而(er)(er)允許其與(yu)(yu)(yu)(yu)吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)(ding)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)基本殘基接觸。后者通過π-陽(yang)離(li)(li)子(zi)(zi)相互作用導(dao)(dao)致(zhi)(zhi)芘部分(fen)(fen)(fen)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)碰(peng)撞猝(cu)(cu)滅(mie)。然而(er)(er)，隨(sui)著XPG的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)增(zeng)加(jia)，我們可以(yi)(yi)預(yu)期PG頭基與(yu)(yu)(yu)(yu)吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)(ding)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)堿(jian)性(xing)殘基發生靜電結(jie)合，從而(er)(er)阻止芘與(yu)(yu)(yu)(yu)吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)(ding)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)陽(yang)離(li)(li)子(zi)(zi)殘基之間的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)直接接觸。隨(sui)著肽(tai)濃度(du)(du)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)增(zeng)加(jia)，吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)肽(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)膜(mo)(mo)結(jie)合以(yi)(yi)協同(tong)方式增(zeng)強，猝(cu)(cu)滅(mie)效率的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)逆轉可能涉及雙(shuang)分(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)層(ceng)中(zhong)脂(zhi)肽(tai)復合物的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)聚(ju)集(ji)。因此，在酸性(xing)含(han)磷脂(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)膜(mo)(mo)中(zhong)，吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)對芘的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)猝(cu)(cu)滅(mie)作用較(jiao)小(xiao)(xiao)。當吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)肽(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)濃度(du)(du)增(zeng)加(jia)到(dao)(dao)肽(tai)/脂(zhi)比(bi)1:10以(yi)(yi)上時(shi)，肽(tai)將以(yi)(yi)高度(du)(du)協同(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方式并入膜(mo)(mo)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)酰基鏈(lian)(lian)(lian)區域（Ha等(deng)人(ren)，2000）（圖9 E），而(er)(er)在中(zhong)性(xing)膜(mo)(mo)中(zhong)，肽(tai)位于(yu)(yu)界面(mian)（圖9 D）。插入吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)(ding)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)量取(qu)決于(yu)(yu)雙(shuang)層(ceng)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)XPG，導(dao)(dao)致(zhi)(zhi)吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)西(xi)(xi)丁(ding)(ding)(ding)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)Trp殘基的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)猝(cu)(cu)滅(mie)占主導(dao)(dao)地位，與(yu)(yu)(yu)(yu)XPG=0.4時(shi)Im的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)顯著減(jian)少(shao)(shao)一致(zhi)(zhi)（圖4a）。

馬蓋寧2和吲哚西啶對巨脂質體的影響

細(xi)胞質(zhi)(zhi)(zhi)膜(mo)通(tong)透性(xing)被(bei)認為(wei)是(shi)馬(ma)加(jia)(jia)寧和吲(yin)哚(duo)肽(tai)(tai)等(deng)(deng)(deng)肽(tai)(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗菌(jun)作用(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)原因(yin)（Matsuzaki，1998，1999；Sitaram和Nagaraj，1999），并提出(chu)(chu)了(le)幾種機制(zhi)模型(xing)（綜述見Bechinger，1999）。孔(kong)或通(tong)道(dao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)形(xing)(xing)(xing)(xing)成(cheng)(cheng)被(bei)認為(wei)會(hui)導(dao)致(zhi)跨膜(mo)電位(wei)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)耗(hao)散和脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)不(bu)(bu)對(dui)(dui)(dui)稱（Falla等(deng)(deng)(deng)人(ren)，1996年；Matsuzaki，1998年，1999年；Sitaram和Nagaraj，1999年）。Magainin 2和吲(yin)哚(duo)肽(tai)(tai)應(ying)按照定義的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)構(gou)(gou)插(cha)入脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)雙(shuang)(shuang)(shuang)層(ceng)(ceng)，與(yu)所(suo)有疏(shu)水(shui)氨基(ji)酸(suan)形(xing)(xing)(xing)(xing)成(cheng)(cheng)構(gou)(gou)象，形(xing)(xing)(xing)(xing)成(cheng)(cheng)一(yi)(yi)個表面，然后與(yu)膜(mo)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)疏(shu)水(shui)核(he)心接(jie)觸。因(yin)此，這(zhe)些肽(tai)(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)膜(mo)插(cha)入迫使磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)酰基(ji)鏈分(fen)(fen)開(kai)。這(zhe)些肽(tai)(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗菌(jun)作用(yong)還(huan)可(ke)能包括(kuo)局部(bu)相變，如(ru)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)肽(tai)(tai)膠(jiao)束從雙(shuang)(shuang)(shuang)層(ceng)(ceng)分(fen)(fen)離(li)，或由(you)于(yu)插(cha)入肽(tai)(tai)引起膜(mo)曲(qu)率(lv)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)局部(bu)變化(hua)，這(zhe)可(ke)能導(dao)致(zhi)雙(shuang)(shuang)(shuang)層(ceng)(ceng)結(jie)構(gou)(gou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)局部(bu)坍塌(ta)。在(zai)(zai)分(fen)(fen)子(zi)(zi)(zi)水(shui)平上，這(zhe)些過程可(ke)能是(shi)本文報道(dao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)magainin 2和吲(yin)哚(duo)美辛誘導(dao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)巨(ju)大囊(nang)泡(pao)形(xing)(xing)(xing)(xing)成(cheng)(cheng)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)礎(chu)。magainin的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)裂解(jie)活(huo)性(xing)對(dui)(dui)(dui)靶膜(mo)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)高度(du)(du)敏(min)感，該肽(tai)(tai)優先結(jie)合并滲(shen)透陰離(li)子(zi)(zi)(zi)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)膜(mo)（Matsuzaki等(deng)(deng)(deng)人(ren)，1991、1993、1995a、1998）。因(yin)此，對(dui)(dui)(dui)微生物致(zhi)死(si)濃度(du)(du)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)馬(ma)蓋寧不(bu)(bu)會(hui)裂解(jie)哺(bu)乳動(dong)物細(xi)胞，因(yin)為(wei)哺(bu)乳動(dong)物細(xi)胞的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)質(zhi)(zhi)(zhi)膜(mo)外層(ceng)(ceng)不(bu)(bu)含帶(dai)負(fu)電的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)（Ma tsuzaki，1999）。大腸桿(gan)菌(jun)暴露于(yu)magainin會(hui)導(dao)致(zhi)細(xi)菌(jun)表面出(chu)(chu)現氣(qi)泡(pao)（Matsuzaki等(deng)(deng)(deng)人(ren)，1997年）。在(zai)(zai)本研究(jiu)中(zhong)，觀察到由(you)馬(ma)蓋寧2和吲(yin)哚(duo)青(qing)霉素誘導(dao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)巨(ju)大脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)囊(nang)泡(pao)形(xing)(xing)(xing)(xing)成(cheng)(cheng)，這(zhe)代表了(le)它們與(yu)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)雙(shuang)(shuang)(shuang)層(ceng)(ceng)結(jie)合的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)更宏(hong)觀的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)變化(hua)。重(zhong)(zhong)要(yao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是(shi)，酸(suan)性(xing)PG的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)存(cun)在(zai)(zai)是(shi)兩種肽(tai)(tai)產生囊(nang)泡(pao)所(suo)必需的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。巨(ju)大脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)囊(nang)泡(pao)形(xing)(xing)(xing)(xing)成(cheng)(cheng)需要(yao)反復應(ying)用(yong)magainin 2，因(yin)此暗示(shi)了(le)一(yi)(yi)種濃度(du)(du)依賴性(xing)作用(yong)機制(zhi)。已經證明，在(zai)(zai)存(cun)在(zai)(zai)magainin的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)情(qing)況下(xia)形(xing)(xing)(xing)(xing)成(cheng)(cheng)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)孔(kong)隙是(shi)短暫(zan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)，具(ju)有有限的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)壽(shou)命（Matsuzaki等(deng)(deng)(deng)人(ren)，1995b）。當附(fu)近的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)孔(kong)隙崩解(jie)時，可(ke)能形(xing)(xing)(xing)(xing)成(cheng)(cheng)肽(tai)(tai)和脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)超分(fen)(fen)子(zi)(zi)(zi)復合物，從而(er)(er)導(dao)致(zhi)雙(shuang)(shuang)(shuang)層(ceng)(ceng)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)短暫(zan)破壞（圖6）。同時，一(yi)(yi)些肽(tai)(tai)分(fen)(fen)子(zi)(zi)(zi)應(ying)該轉移(yi)到膜(mo)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)內(nei)部(bu)小(xiao)葉中(zhong)（Matsuzaki等(deng)(deng)(deng)人(ren)，1995a，1996），從而(er)(er)使膜(mo)重(zhong)(zhong)組和愈合。由(you)于(yu)magainin 2而(er)(er)形(xing)(xing)(xing)(xing)成(cheng)(cheng)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)內(nei)吞小(xiao)泡(pao)比(bi)胞吐更明顯（圖6），這(zhe)可(ke)能與(yu)肽(tai)(tai)在(zai)(zai)雙(shuang)(shuang)(shuang)層(ceng)(ceng)外表面的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)不(bu)(bu)對(dui)(dui)(dui)稱應(ying)用(yong)有關。因(yin)此，巨(ju)大脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)囊(nang)泡(pao)化(hua)可(ke)以(yi)緩(huan)解(jie)由(you)于(yu)不(bu)(bu)對(dui)(dui)(dui)稱肽(tai)(tai)結(jie)合和隨(sui)后的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)膜(mo)膨(peng)脹而(er)(er)導(dao)致(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)雙(shuang)(shuang)(shuang)層(ceng)(ceng)不(bu)(bu)利應(ying)變。囊(nang)泡(pao)化(hua)可(ke)以(yi)降低剩余巨(ju)大脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體膜(mo)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽(tai)(tai)濃度(du)(du)，從而(er)(er)減少孔(kong)隙形(xing)(xing)(xing)(xing)成(cheng)(cheng)。隨(sui)后，需要(yao)繼續向膜(mo)中(zhong)添(tian)加(jia)(jia)magainin 2以(yi)引起巨(ju)大脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)進一(yi)(yi)步囊(nang)泡(pao)化(hua)（圖6）。

吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)(duo)(duo)西丁只含有(you)13個氨基酸，因此(ci)太短，無法(fa)跨(kua)越雙層。然而(er)，該肽可以作(zuo)為(wei)聚(ju)集物或(huo)帶有(you)相關酸性磷(lin)脂的(de)(de)(de)(de)頭尾二聚(ju)體橫(heng)跨(kua)雙層（圖(tu)9 E），從而(er)導致膜(mo)(mo)不(bu)穩定(ding)性。已(yi)經證(zheng)明，吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)(duo)(duo)西丁能夠通過(guo)穿過(guo)外膜(mo)(mo)殺死革蘭氏陰性細菌，并通過(guo)形成(cheng)通道(dao)破(po)壞細胞質膜(mo)(mo)（Falla et al.，1996）。與magainin 2的(de)(de)(de)(de)作(zuo)用相比，吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)(duo)(duo)青(qing)霉素誘導的(de)(de)(de)(de)內(nei)吞小泡較(jiao)小（圖(tu)7）可能反映了(le)這(zhe)些肽與脂質相互作(zuo)用的(de)(de)(de)(de)不(bu)同(tong)模式。一(yi)(yi)些吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)(duo)(duo)肽分子(zi)可能會轉移到膜(mo)(mo)的(de)(de)(de)(de)內(nei)部小葉中。除了(le)具有(you)廣(guang)譜的(de)(de)(de)(de)抗真菌和抗菌活性外，吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)(duo)(duo)西丁對哺乳動(dong)物細胞也有(you)毒性（Schluesener等人，1993年；Ahmad等人，1995年）。有(you)趣(qu)的(de)(de)(de)(de)是，吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)(duo)(duo)西丁對SOPC和SOPC膽(dan)固醇(chun)巨型脂質體的(de)(de)(de)(de)作(zuo)用不(bu)同(tong)。在這(zhe)一(yi)(yi)階段，根本原(yuan)因尚不(bu)確定(ding)，可能與膽(dan)固醇(chun)對雙層結(jie)構以及吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)(duo)(duo)肽在膜(mo)(mo)中的(de)(de)(de)(de)取(qu)向的(de)(de)(de)(de)影(ying)響(xiang)(xiang)有(you)關。因此(ci)，需要進一(yi)(yi)步的(de)(de)(de)(de)研究來(lai)闡明膽(dan)固醇(chun)對吲(yin)(yin)哚(duo)(duo)(duo)(duo)肽膜(mo)(mo)結(jie)合的(de)(de)(de)(de)影(ying)響(xiang)(xiang)。

我們的(de)(de)(de)(de)結果表(biao)明，在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)帶負(fu)電(dian)(dian)荷的(de)(de)(de)(de)磷(lin)脂(zhi)(zhi)存在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)下(xia)，magainin 2對(dui)所用生物膜(mo)(mo)(mo)(mo)模型的(de)(de)(de)(de)作(zuo)用顯(xian)著增(zeng)強。除了膜(mo)(mo)(mo)(mo)負(fu)電(dian)(dian)荷外(wai)(wai)，肽(tai)(tai)/脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)化學計量也被證明是雙(shuang)(shuang)層(ceng)(ceng)中(zhong)馬(ma)蓋(gai)寧組(zu)織的(de)(de)(de)(de)重(zhong)要決(jue)定(ding)因(yin)素（Ludtke等人(ren)，1994）。在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)低肽(tai)(tai)/脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)比率(lv)下(xia)，=-螺旋肽(tai)(tai)基(ji)本(ben)上(shang)平(ping)(ping)行于膜(mo)(mo)(mo)(mo)表(biao)面(mian)，并淺穿透膜(mo)(mo)(mo)(mo)的(de)(de)(de)(de)疏(shu)水核心（Bechinger等人(ren)，1993年；Matsuzaki等人(ren)，1994年）。該(gai)(gai)位(wei)置(zhi)將(jiang)脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)頭基(ji)推到(dao)一邊，迫使疏(shu)水區域(yu)形(xing)成(cheng)(cheng)間(jian)(jian)隙(xi)，而(er)膜(mo)(mo)(mo)(mo)變(bian)薄以(yi)填充(chong)間(jian)(jian)隙(xi)（Ludtke et al.，1995）。先前已強調了由magainin形(xing)成(cheng)(cheng)的(de)(de)(de)(de)孔(kong)隙(xi)的(de)(de)(de)(de)瞬時(shi)性(xing)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)（Matsuzaki等人(ren)，1995b）。膜(mo)(mo)(mo)(mo)的(de)(de)(de)(de)局部和(he)(he)瞬時(shi)破壞可能(neng)(neng)(neng)(neng)需(xu)要肽(tai)(tai)與(yu)(yu)(yu)靶(ba)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)膜(mo)(mo)(mo)(mo)的(de)(de)(de)(de)不對(dui)稱結合。因(yin)此(ci)，在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)magainin與(yu)(yu)(yu)靶(ba)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)膜(mo)(mo)(mo)(mo)雙(shuang)(shuang)層(ceng)(ceng)的(de)(de)(de)(de)外(wai)(wai)小(xiao)葉(xie)結合后(hou)(hou)，該(gai)(gai)外(wai)(wai)單分(fen)(fen)(fen)子(zi)層(ceng)(ceng)的(de)(de)(de)(de)側(ce)壓力比內小(xiao)葉(xie)增(zeng)加。此(ci)外(wai)(wai)，平(ping)(ping)行于層(ceng)(ceng)平(ping)(ping)面(mian)的(de)(de)(de)(de)=-螺旋的(de)(de)(de)(de)表(biao)面(mian)位(wei)置(zhi)在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)外(wai)(wai)層(ceng)(ceng)單層(ceng)(ceng)中(zhong)施加曲(qu)率(lv)應變(bian)，導致正(zheng)(zheng)的(de)(de)(de)(de)自發(fa)曲(qu)率(lv)。當兩(liang)個小(xiao)葉(xie)之間(jian)(jian)的(de)(de)(de)(de)側(ce)壓差(cha)大(da)(da)小(xiao)和(he)(he)與(yu)(yu)(yu)正(zheng)(zheng)自發(fa)曲(qu)率(lv)相關的(de)(de)(de)(de)能(neng)(neng)(neng)(neng)量超(chao)過膜(mo)(mo)(mo)(mo)變(bian)形(xing)所需(xu)的(de)(de)(de)(de)能(neng)(neng)(neng)(neng)量時(shi)，雙(shuang)(shuang)分(fen)(fen)(fen)子(zi)層(ceng)(ceng)不穩(wen)定(ding)，肽(tai)(tai)相對(dui)于層(ceng)(ceng)平(ping)(ping)面(mian)的(de)(de)(de)(de)垂直方向發(fa)生重(zhong)新定(ding)向，孔(kong)隙(xi)打開(kai)。這(zhe)些孔(kong)隨后(hou)(hou)可能(neng)(neng)(neng)(neng)在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)靶(ba)體內聚集成(cheng)(cheng)超(chao)分(fen)(fen)(fen)子(zi)結構，如在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)巨型脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體中(zhong)觀(guan)察到(dao)的(de)(de)(de)(de)（圖6）。因(yin)此(ci)，孔(kong)隙(xi)和(he)(he)不穩(wen)定(ding)狀態將(jiang)是暫時(shi)的(de)(de)(de)(de)，允許(xu)雙(shuang)(shuang)層(ceng)(ceng)愈合。為此(ci)，馬(ma)格(ge)蛋(dan)白2在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)其序列的(de)(de)(de)(de)中(zhong)間(jian)(jian)含有(you)一組(zu)正(zheng)(zheng)電(dian)(dian)荷。同(tong)(tong)樣，當該(gai)(gai)肽(tai)(tai)在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)雙(shuang)(shuang)層(ceng)(ceng)中(zhong)形(xing)成(cheng)(cheng)瞬時(shi)孔(kong)并垂直于膜(mo)(mo)(mo)(mo)平(ping)(ping)面(mian)定(ding)向時(shi)，這(zhe)些陽離子(zi)殘基(ji)也可能(neng)(neng)(neng)(neng)靜電(dian)(dian)結合到(dao)PG，類似于此(ci)處提出的(de)(de)(de)(de)吲(yin)哚肽(tai)(tai)組(zu)織（圖9）。原核細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)和(he)(he)真(zhen)(zhen)核細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)膜(mo)(mo)(mo)(mo)脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)(fen)的(de)(de)(de)(de)主要區別在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)于后(hou)(hou)者富含膽(dan)(dan)固(gu)醇(chun)（Op den Kamp，1979）。上(shang)述機制也將(jiang)與(yu)(yu)(yu)膽(dan)(dan)固(gu)醇(chun)的(de)(de)(de)(de)存在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)相兼(jian)容，以(yi)防止magainin 2的(de)(de)(de)(de)膜(mo)(mo)(mo)(mo)擾動作(zuo)用。更(geng)具體地(di)說，膽(dan)(dan)固(gu)醇(chun)在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)人(ren)類質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)膜(mo)(mo)(mo)(mo)的(de)(de)(de)(de)兩(liang)個小(xiao)葉(xie)之間(jian)(jian)轉移(yi)（觸發(fa)器）非常快(kuai)（Lange et al.，1981）。因(yin)此(ci)，這(zhe)種膽(dan)(dan)固(gu)醇(chun)的(de)(de)(de)(de)快(kuai)速(su)易位(wei)可以(yi)消除在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)magainin 2結合到(dao)后(hou)(hou)一單層(ceng)(ceng)后(hou)(hou)靶(ba)膜(mo)(mo)(mo)(mo)內外(wai)(wai)小(xiao)葉(xie)側(ce)壓力的(de)(de)(de)(de)差(cha)異。因(yin)此(ci)，與(yu)(yu)(yu)細(xi)(xi)(xi)(xi)菌靶(ba)點相比，這(zhe)種肽(tai)(tai)在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)真(zhen)(zhen)核細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)中(zhong)產生毒性(xing)作(zuo)用需(xu)要大(da)(da)量的(de)(de)(de)(de)magainin 2（Zasloff，1987）。據估計，真(zhen)(zhen)核細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)膜(mo)(mo)(mo)(mo)外(wai)(wai)小(xiao)葉(xie)的(de)(de)(de)(de)平(ping)(ping)衡側(ce)壓力約為32 mN/m（Demel等人(ren)，1975年）。在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)超(chao)過34 mN/m的(de)(de)(de)(de)壓力下(xia)，觀(guan)察到(dao)吲(yin)哚西丁高(gao)效(xiao)(xiao)滲(shen)透到(dao)單層(ceng)(ceng)中(zhong)，這(zhe)可能(neng)(neng)(neng)(neng)部分(fen)(fen)(fen)解釋(shi)了該(gai)(gai)肽(tai)(tai)在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)真(zhen)(zhen)核細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)溶解作(zuo)用。此(ci)外(wai)(wai)，哺乳動物質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)膜(mo)(mo)(mo)(mo)的(de)(de)(de)(de)外(wai)(wai)小(xiao)葉(xie)僅(jin)由兩(liang)性(xing)離子(zi)磷(lin)脂(zhi)(zhi)組(zu)成(cheng)(cheng)，而(er)細(xi)(xi)(xi)(xi)菌膜(mo)(mo)(mo)(mo)含有(you)大(da)(da)量帶負(fu)電(dian)(dian)的(de)(de)(de)(de)PG（Op den Kamp，1979）。因(yin)此(ci)，由于缺乏負(fu)電(dian)(dian)荷和(he)(he)高(gao)壓，預計magainin 2與(yu)(yu)(yu)真(zhen)(zhen)核細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)膜(mo)(mo)(mo)(mo)的(de)(de)(de)(de)相互(hu)作(zuo)用較(jiao)弱，而(er)更(geng)有(you)效(xiao)(xiao)的(de)(de)(de)(de)插入(ru)吲(yin)哚肽(tai)(tai)將(jiang)能(neng)(neng)(neng)(neng)夠(gou)干擾真(zhen)(zhen)核細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)雙(shuang)(shuang)層(ceng)(ceng)的(de)(de)(de)(de)組(zu)織。因(yin)此(ci)，脂(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)特異性(xing)可能(neng)(neng)(neng)(neng)導致這(zhe)兩(liang)種肽(tai)(tai)的(de)(de)(de)(de)不同(tong)(tong)毒性(xing)。

結論

由(you)于抗(kang)菌肽的(de)(de)(de)(de)(de)詳細作(zuo)(zuo)用(yong)機制尚待闡明，比(bi)較兩種結(jie)構上不(bu)相(xiang)(xiang)關(guan)的(de)(de)(de)(de)(de)肽吲哚肽和馬蓋寧2對(dui)模型生(sheng)物(wu)膜(mo)的(de)(de)(de)(de)(de)影響很有(you)意義。盡管它們(men)(men)(men)的(de)(de)(de)(de)(de)構象不(bu)同，且前者的(de)(de)(de)(de)(de)長度約為后者的(de)(de)(de)(de)(de)一半，但它們(men)(men)(men)也具有(you)諸(zhu)如凈正電(dian)荷和兩親性等特征(zheng)，導致它們(men)(men)(men)與磷(lin)(lin)脂(zhi)膜(mo)結(jie)合。酸性磷(lin)(lin)脂(zhi)進(jin)一步增(zeng)強了這(zhe)(zhe)(zhe)種相(xiang)(xiang)互作(zuo)(zuo)用(yong)，這(zhe)(zhe)(zhe)可能(neng)對(dui)它們(men)(men)(men)的(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)菌活性很重要。酸性磷(lin)(lin)脂(zhi)是這(zhe)(zhe)(zhe)些(xie)肽囊泡形成巨大脂(zhi)質體所(suo)(suo)必需(xu)的(de)(de)(de)(de)(de)，它們(men)(men)(men)都會導致酸性磷(lin)(lin)脂(zhi)分離，將(jiang)它們(men)(men)(men)絡(luo)合成超(chao)分子簇(cu)。同樣，這(zhe)(zhe)(zhe)兩種肽都增(zeng)加了酰基鏈順序。所(suo)(suo)有(you)這(zhe)(zhe)(zhe)些(xie)作(zuo)(zuo)用(yong)都與抗(kang)菌作(zuo)(zuo)用(yong)所(suo)(suo)必需(xu)的(de)(de)(de)(de)(de)協同膜(mo)結(jie)合相(xiang)(xiang)一致，可能(neng)涉(she)及肽的(de)(de)(de)(de)(de)瞬(shun)時跨(kua)膜(mo)定向。還(huan)可能(neng)是，它們(men)(men)(men)的(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)菌作(zuo)(zuo)用(yong)需(xu)要目標膜(mo)最初不(bu)對(dui)稱地暴露于這(zhe)(zhe)(zhe)些(xie)肽中，并與系統放松回到熱(re)力學平衡有(you)關(guan)。