材(cai)料和方(fang)法

2.1. 酒樣

分析了 20 種單品(pin)種、白葡(pu)萄(tao)酒(jiu)和(he)紅葡(pu)萄(tao)酒(jiu)。 他們(men)包括(kuo)來自(zi)白葡(pu)萄(tao)品(pin)種的(de)(de)樣本：Tsaousi（W1、W2、W3、W4、W5）、Robola（W6、W7、W8）、Lagorthi（W9、W10）、Sideritis（W11、W12）、Tourkopoula（W13） ) 和(he)紅色 V. vinifera 葡(pu)萄(tao)品(pin)種：Augoustiatis (R1, R2)、Refosco Rosso (R3, R4)、Mavrodafni (R5, R6)、Vertzami (R7)，栽培于希臘西部。 相應地(di)，葡(pu)萄(tao)酒(jiu)是使(shi)用相同的(de)(de)釀造協(xie)議(yi)生(sheng)產的(de)(de)，白色或紅色。

2.2. 其他(ta)材料(liao)

牛血清白(bai)蛋白(bai) (BSA) 購自(zi)(zi) Acros Organics (NJ, USA)，L-(+)-酒石(shi)酸(suan)(suan)(suan)購自(zi)(zi) Riedel-de Hae¨n (Seelze, Germany)，蘋果(guo)酸(suan)(suan)(suan)、乳酸(suan)(suan)(suan)和(he)(he)檸檬酸(suan)(suan)(suan)購自(zi)(zi)默克 (Darmstadt) ， 德國）。 KCl、NaCl、MgCl2.6H2O、CaCl2.2H2O、甘油，以及(ji)標準化(hua)合物(wu) (+)-兒茶素(su)、沒食子酸(suan)(suan)(suan)、乙醛、乙酸(suan)(suan)(suan)乙酯、甲(jia)醇(chun)(chun)、丙醇(chun)(chun)-1、甲(jia)基(ji)-2-丙醇(chun)(chun)-1、甲(jia)基(ji)- 2-丁醇(chun)(chun)-1、甲(jia)基(ji)-3-丁醇(chun)(chun)-1 和(he)(he)甲(jia)基(ji)-4-戊醇(chun)(chun)-2 來自(zi)(zi) Sigma-Aldrich 化(hua)學公(gong)司（美國威斯康星州）。 緩(huan)沖溶(rong)液（pH 7.00 ± 0.02 和(he)(he) pH 4.01 ± 0.02）來自(zi)(zi) Mettler-Toledo。 無(wu)水(shui)乙醇(chun)(chun)、甲(jia)醇(chun)(chun)（99.8%，UV-IR-HPLC）、甲(jia)酸(suan)(suan)(suan)（98%）和(he)(he)鹽酸(suan)(suan)(suan)（37%）來自(zi)(zi) Panreac Quimica SA（西班牙）、硝酸(suan)(suan)(suan)（65%）、磷酸(suan)(suan)(suan)（85%、 ACS-ISO)、硫酸(suan)(suan)(suan) (95–97%)、氫氧化(hua)鈉、碘 (FIXANAL)、淀粉、EDTA 和(he)(he)磷酸(suan)(suan)(suan)二氫鉀來自(zi)(zi) Riedel-de Haen (Seelze, Germany)。 考馬斯亮藍 G250、(-)-表兒茶素(su)、阿魏酸(suan)(suan)(suan)、咖啡酸(suan)(suan)(suan)和(he)(he)對香豆酸(suan)(suan)(suan)來自(zi)(zi) Fluka (Buchs, Switzerland)。 花青素(su)購自(zi)(zi) Extrasynthese (Genay, France)。 葡萄籽和(he)(he)皮單寧（Tanipepin 和(he)(he) Taniraisin）的商業提取物(wu)來自(zi)(zi) Martin Vialattenologie（法(fa)國埃(ai)佩(pei)奈）。 HPLC 中使用(yong)的水(shui)由(you) MilliQ 水(shui)系統(tong)獲得，最小電(dian)阻為(wei) 18.2 MV cm。

2.3. 模(mo)型解決(jue)方案

制備濃度(du)為(wei) 8% 至 16% (v/v) 的乙醇水溶(rong)(rong)液(ye)，以(yi)匹配葡(pu)萄(tao)酒范(fan)圍。 三(san)組(zu)含(han)有 BSA 蛋白或商業(ye)單寧(ning)的溶(rong)(rong)液(ye)制備在：(a) 水中，(b) 12% (v/v) 乙醇溶(rong)(rong)液(ye)和 (c) 模型(xing)葡(pu)萄(tao)酒溶(rong)(rong)液(ye)。 模型(xing)葡(pu)萄(tao)酒溶(rong)(rong)液(ye)由水/乙醇混合物 (88:12%, v/v) 和 2 g/L 酒石酸組(zu)成，pH 值通過添加 2 MNaOH 調節至 3.5。 研究的濃度(du)為(wei) 0.025、0.100、0.250、0.500、0.750 和 1.000 克 BSA/L，以(yi)及 0.1、0.5、1.0、2.0 和 4.0 克丹尼皮(pi)平或丹寧(ning)菌素/L。

2.4. 方法

2.4.1. 表面(mian)張力測(ce)定(ding)

使用(yong) Wilhelmy Constant Run 程序，通過 Wilhelmy 板法(fa)（自動 KSV Sigma_70 張力計，赫爾辛基，芬蘭(lan)）在 25 度下進(jin)行表(biao)面張力測量。 結果表(biao)示為 mN/m，是(shi)三次重復分析的平均值(zhi)。 獲得的相對標準偏差 (%) 低于 5%。

2.4.2. 分析測定

基本釀酒參數：乙醇含量（% vol.）、可滴定酸(suan)度（g 酒石酸(suan)/L）和(he)揮發性(xing)酸(suan)度（g 乙酸(suan)/L）、pH 值和(he)還(huan)原(yuan)糖（g/L）通過傅立(li)(li)葉(xie)變換確定紅外(wai)光(guang)譜 (FTIR) 技術，使用(yong) FOSS 自動分析儀（WineScanTM FT120 Basic，丹麥）。 量化(hua)基于校(xiao)準曲線(xian)，該曲線(xian)使用(yong)從大量希(xi)臘品種(zhong)葡萄酒分析中獲得的(de)數據建立(li)(li)。 根據國際葡萄與葡萄酒組織(zhi) (1990) 快速方法測定總(zong) SO2 (mg/L)。 所(suo)有分析均一(yi)式(shi)兩份進(jin)行。 重復性(xing)的(de)相對標準偏(pian)差 (RSD %) 低(di)于 10%。

總酚(fen)指數(shu)和單寧(ning)：總酚(fen)指數(shu)在 280 nm 處測(ce)(ce)定（Somers，1975；Sudraud，1958），而 Glories 方法（1978）用于(yu)(yu)測(ce)(ce)定單寧(ning)。 Shimadzu UV-1601 分(fen)光光度計（日本京都(dou)）結合 UVPC-1601 軟件用于(yu)(yu)所有 UV-vis 吸(xi)光度測(ce)(ce)量。 所有分(fen)析(xi)均(jun)一式(shi)兩(liang)份進行(xing)。 重復性的相對標準偏差 (RSD %) 低(di)于(yu)(yu) 10%。

蛋(dan)白質：布拉(la)德福德方法（布拉(la)德福德，1976 年(nian)）用于(yu)測(ce)定蛋(dan)白質（Moreno-Arribas 等人(ren)，2002 年(nian)；Esteruelas 等人(ren)，2009 年(nian)）。 所(suo)有分析均一式兩份進(jin)行。 重復(fu)性的相對標準偏(pian)差 (RSD %) 低于(yu) 10%。

通(tong)過 HPLC 測定(ding)(ding)有(you)機(ji)酸、陽離子和甘油：使(shi)用(yong) Waters HPLC 機(ji)器(qi)(qi)，該機(ji)器(qi)(qi)由 Waters 510 泵和帶有(you) 20 mL 定(ding)(ding)量環(huan)的(de) Rheodyne 7725i 型進樣閥組成。 在分析之前(qian)，將(jiang)樣品通(tong)過 0.45 Millipore 過濾(lv)器(qi)(qi)過濾(lv)并通(tong)過 Sep-Pak C18 小(xiao)柱（Waters，美國(guo)）進行純(chun)化。

酒石酸(suan)(suan)(suan)(suan)、蘋果酸(suan)(suan)(suan)(suan)、乳酸(suan)(suan)(suan)(suan)和檸檬酸(suan)(suan)(suan)(suan)的分(fen)離在 250 mm ? 4.6 毫米(mi)內(nei)徑，5 毫米(mi)； PrevailTM Organic Acid column (Alltech Associates, Inc., Deerfield, USA) 根據 OIV (1990)。 對于(yu)檢測，使用(yong)設置為 210 nm 的 Waters 996 光電二極管陣列檢測器。 洗脫系統(tong)由(you) 25 mM KH2PO4 溶(rong)液（pH 2.5）組成； 流(liu)速為 1.5 mL/min，進樣量(liang)為 20 mL。 四種(zhong)有機酸(suan)(suan)(suan)(suan)的七點校準曲線用(yong)于(yu)定量(liang)。

鉀、鈉、鎂和鈣(gai)的分離在 150 mm ? 3.9 毫(hao)米(mi)內(nei)徑(jing)，5 毫(hao)米(mi)； IC-Pak Cation M/D 柱（Waters，美國(guo)），根據 Theodoridis (1997) 的方法(fa)在等(deng)度條件下進(jin)行(xing)。 檢(jian)測使用 Waters 431 電導檢(jian)測器。 洗脫系統(tong)由 0.1 mM EDTA 和 3 mM HNO3 溶液(ye)組成。 流速(su)為 1 mL/min，進(jin)樣體(ti)積(ji)為 20 mL。 四種陽離子(zi)的七(qi)點校準曲(qu)線用于(yu)定量。

甘油的分(fen)離在 150 mm * 7.8 mm id, 7 mm 上進行； 根(gen)據 Zoecklein 等(deng)人所述的方法(fa)，IC-PakTM 離子排阻柱(zhu)（Waters，美國(guo)）在 60 ℃下恒溫。 (1995)。 對(dui)于檢測(ce)，使(shi)用(yong) Waters 410 示差折(zhe)光檢測(ce)器。 洗脫系(xi)統(tong)由等(deng)度條件下的 0.005 M H2SO4 溶液(ye)組成。 流速為 0.5 mL/min，進樣體積為 20 mL。 使(shi)用(yong)甘油標準溶液(ye)的七點校準曲線進行定(ding)量。

所有(you)分(fen)析均(jun)一式(shi)兩份(fen)進(jin)行。 通(tong)(tong)過分(fen)析通(tong)(tong)常(chang)在(zai)葡(pu)(pu)萄(tao)酒中發現的兩種不同濃度的五種加標模型葡(pu)(pu)萄(tao)酒溶液來(lai)評(ping)估方(fang)法的重復性。 所有(you)化合物的相對標準(zhun)偏差(cha) (RSD %) 均(jun)低于 10%。

酚類化(hua)合(he)(he)物的(de) HPLC：根據 Van De Casteele 等人的(de)方法，使用(yong)帶有(you) PDA 檢(jian)測(ce)器的(de) HPLC 測(ce)定單個(ge)酚類化(hua)合(he)(he)物（兒(er)茶(cha)素、表(biao)兒(er)茶(cha)素、沒(mei)食子酸(suan)、咖啡(fei)酸(suan)、對(dui)香豆(dou)酸(suan)、阿魏酸(suan)和(he)花(hua)青素）的(de)濃度. (1983)。 為(wei)了量化(hua)，酚類化(hua)合(he)(he)物的(de)標(biao)準(zhun)(zhun)溶液以通(tong)常在葡萄酒中發現的(de)濃度范圍內的(de)濃度使用(yong)。 結果表(biao)示為(wei)mg咖啡(fei)酸(suan)當量/L。 所有(you)分析均一式(shi)兩份進行。 所有(you)化(hua)合(he)(he)物的(de)重復(fu)性相對(dui)標(biao)準(zhun)(zhun)偏差 (RSD %) 均低于 8%。

GC-FID 檢(jian)測揮發性(xing)化(hua)(hua)合物(wu)(wu)：將(jiang)含有 50 mL 4-甲基-2-戊醇 (10 g/L) 水醇溶液(ye)作為內(nei)(nei)標(biao)的葡萄酒(jiu)樣(yang)品 (5 mL) 直接注(zhu)射到(dao) Carlo Erba（GC 8000 系列）上配(pei)備火焰(yan)離子化(hua)(hua)檢(jian)測器 (EL 980) 和(he)(he) 50 m * 0.32 mm 內(nei)(nei)徑、0.20 mm CPCarbowax 400 (Varian Inc., USA) 毛(mao)細(xi)管柱(zhu)的氣相(xiang)色譜儀。 烘(hong)箱溫(wen)度(du)保(bao)持在(zai)(zai)(zai)50℃下10分(fen)(fen)鐘，編程到(dao)80℃下5℃/min，然后在(zai)(zai)(zai)80℃下保(bao)持10分(fen)(fen)鐘。 進(jin)樣(yang)器和(he)(he)檢(jian)測器溫(wen)度(du)分(fen)(fen)別為 200 和(he)(he) 230 ℃。 進(jin)樣(yang) (1 mL) 以(yi)分(fen)(fen)流模式(shi) (150 mL/min) 完(wan)成(cheng)。 氦氣是載(zai)氣 (2 mL/min, 90 kPa)。 揮發性(xing)化(hua)(hua)合物(wu)(wu)（乙醛、甲醇、乙酸(suan)乙酯、1-丙(bing)(bing)醇、2-甲基-1-丙(bing)(bing)醇、2-甲基-1-丁醇和(he)(he)3-甲基-1-丁醇）通(tong)過比較保(bao)留時間(jian)與(yu)參考化(hua)(hua)合物(wu)(wu)。 為了量化(hua)(hua)，揮發物(wu)(wu)的標(biao)準溶液(ye)以(yi)通(tong)常在(zai)(zai)(zai)葡萄酒(jiu)中發現的濃度(du)范圍內(nei)(nei)的濃度(du)使(shi)用(yong)（Bertrand，1968 年(nian)；Gkoulioti，2000 年(nian)）。 所有分(fen)(fen)析均一式(shi)兩份進(jin)行。 通(tong)過分(fen)(fen)析通(tong)常在(zai)(zai)(zai)葡萄酒(jiu)中發現的兩種不同濃度(du)的五種加(jia)標(biao)模型葡萄酒(jiu)溶液(ye)來評估該方法的重復性(xing)。 獲得(de)的相(xiang)對標(biao)準偏差 (RSD %) 在(zai)(zai)(zai) 3.5% 和(he)(he) 8.2% 之間(jian)變化(hua)(hua)。

2.4.3. 統計分析

相關分(fen)析(xi)(xi)被用(yong)于檢驗葡萄酒的表面張力和(he)(he)化學成分(fen)之間的線性關系。 為了(le)獲(huo)得預測方程，使(shi)用(yong)了(le)單一和(he)(he)多元回歸(gui)分(fen)析(xi)(xi)。 使(shi)用(yong)SPSS軟件，版本14.0進行計算。

葡萄酒的表面張力與酒本身的成分之間的相關性論文——摘要、簡介

葡萄酒的表面張力與酒本身的成分之間的相關性論文——材料和方法

葡萄酒的表面張力與酒本身的成分之間的相關性論文——結果與討論

葡萄酒的表面張力與酒本身的成分之間的相關性論文——結論、致謝！