2、實驗材料和方法

2.1、材料

使用(yong)了一(yi)種陰離(li)子(zi)表面(mian)(mian)活(huo)性(xing)(xing)劑和兩種非離(li)子(zi)表面(mian)(mian)活(huo)性(xing)(xing)劑。陰離(li)子(zi)表面(mian)(mian)活(huo)性(xing)(xing)劑是LAS（線性(xing)(xing)烷(wan)基(ji)苯(ben)磺酸(suan)鈉，WAKO Chemical Co.，用(yong)于(yu)JIS中的(de)洗衣(yi)洗滌劑測試，分(fen)(fen)析最低95%）。如下通(tong)過HPLC分(fen)(fen)析獲得碳數分(fen)(fen)布；C10：15.9%、C11：33.2%、C12：30.3%和C13：20.54%。

兩種非(fei)離子表(biao)面(mian)(mian)活(huo)性劑(ji)是(shi)AE8(Alcohol ethoxylate,EO:8,NIPPON SHOKUBAI Co.)和AE9(Alcohol ethoxylate,EO:9,WAKO Chemical Co.)。AE8是(shi)一種市售的(de)用于(yu)洗(xi)衣洗(xi)滌劑(ji)的(de)非(fei)離子表(biao)面(mian)(mian)活(huo)性劑(ji)，它含有約73%的(de)C12-AE8和27%的(de)C14-AE8（通過(guo)HPLC測量）。

2.2、生物降解(jie)過(guo)程評價(jia)稀釋水(shui)按(an)日本工業(ye)標準（JIS）K 01029-11配制。使(shi)用(yong)BOD測(ce)(ce)試(shi)儀（TAITEC Co.）通過(guo)耗氧(yang)量法測(ce)(ce)量生物降解(jie)性變化(hua)。神(shen)奈川(chuan)水(shui)再生中(zhong)心提供(gong)的返還污(wu)泥在收集后(hou)(hou)不久(jiu)就被(bei)冷凍保存(cun)。曝氣48 h后(hou)(hou)的上清液(ye)(ye)用(yong)于試(shi)驗。將該上清液(ye)(ye)稀釋10倍，用(yong)玻璃纖維過(guo)濾器過(guo)濾。12.5 mL/L該液(ye)(ye)體(ti)用(yong)于生物降解(jie)試(shi)驗。生物降解(jie)率計算為BOD/ThOD（理論需(xu)氧(yang)量）。該ThOD值(zhi)通過(guo)使(shi)用(yong)總氧(yang)分析儀(MODEL 1548 Yuasa Ionics Inc.)測(ce)(ce)量總需(xu)氧(yang)量(TOD)來(lai)確認。

2.3、表面張力測量

將(jiang)與BOD測試(shi)(shi)儀的(de)實驗樣(yang)品含有(you)相同種(zhong)源和測試(shi)(shi)試(shi)(shi)劑(ji)的(de)測試(shi)(shi)水制備在(zai)(zai)測試(shi)(shi)瓶中。將(jiang)試(shi)(shi)瓶塞緊，將(jiang)試(shi)(shi)液在(zai)(zai)20℃的(de)避(bi)光培養箱中持續攪拌。在(zai)(zai)表(biao)(biao)面(mian)張力測量之前，以固(gu)定間隔取(qu)出一定量的(de)樣(yang)品溶(rong)液。使用Wilhelmy天(tian)平(ping)方法(fa)EZ-Pi(KIBRON Inc.)的(de)帶有(you)鉑(bo)絲探針的(de)自動表(biao)(biao)面(mian)張力計用于表(biao)(biao)面(mian)張力測量。

2.4、HPLC分析

2.4.1、LAS的固相(xiang)萃取和HPLC分析

從生(sheng)物(wu)(wu)降解(jie)過程中取(qu)出(chu)的液體(ti)樣(yang)品(pin)通(tong)過玻璃纖維過濾(lv)器(1μm,47 mm,GL science)過濾(lv)。然后(hou)將(jiang)提(ti)取(qu)物(wu)(wu)通(tong)過C18 Empore盤(GL Science)過濾(lv)以收(shou)集(ji)表面(mian)活性(xing)劑及(ji)其降解(jie)產物(wu)(wu)。從圓盤上除去(qu)水(shui)后(hou)，加入(ru)5 mL甲醇(chun)（Junsei Chemistry）以洗脫分析(xi)樣(yang)品(pin)，其中包括表面(mian)活性(xing)劑及(ji)其降解(jie)產物(wu)(wu)。該程序的收(shou)集(ji)率約為80%。

使(shi)用紫外檢(jian)測器（UV-8010，Tosoh）和(he)熒(ying)光檢(jian)測器（RF-535，Shimadzu）通過HPLC12分析LAS。ODS柱(zhu)（Kaseisorb ODS2000 4.6?250 mm，Tokyo Chemical Industry）在柱(zhu)溫40?C下使(shi)用。加入(ru)0.1 M NaClO4的甲醇-水(45:55)用于流動相13)。流速為(wei)1.0 mL/min(ISOCRATIC)。

2.4.2、AE的固相萃取衍生化(hua)

對AE進(jin)行(xing)了相同的固相萃取程(cheng)序(xu)。提取250μL AE-甲(jia)醇溶液置(zhi)于試(shi)管中(zhong)，減(jian)壓揮發甲(jia)醇。然后加(jia)入(ru)250μL二氯甲(jia)烷(Junsei Chemistry)和內標C18醇(Junsei Chemistry)。為了獲得紫外線吸收，AE通過添加(jia)5μL異氰酸苯酯（Wako Pure Chemical Industries,Ltd.）衍生(sheng)化，并(bing)在烘箱中(zhong)在55±2?C下加(jia)熱45分(fen)鐘14,15。該程(cheng)序(xu)的收集(ji)率(lv)為約(yue)85%。

熱處理后(hou)，在試管中的樣(yang)品中加入250μL甲(jia)醇，作為分析樣(yang)品。通(tong)過與(yu)衍生(sheng)醇的HPLC峰（Junsei Chemistry）進行比較，確定了每(mei)個烷基鏈長度(du)的AE。

2.4.3、AE的HPLC分(fen)析條件(jian)

使用與LAS分(fen)析(xi)相(xiang)同(tong)的色譜柱，并使用UV-8010作為(wei)檢(jian)測(ce)器(qi)來分(fen)析(xi)AE。柱溫保(bao)持在25?C，流動相(xiang)使用甲醇-水(shui)（8:2至10:0）。流速為(wei)1.5 mL/min（15分(fen)鐘(zhong)溶劑梯度）。

2.5、急性(xing)水生(sheng)毒性(xing)試驗

大型水蚤用(yong)于測試(shi)(shi)。為了使用(yong)最近24小時內出生(sheng)(sheng)(sheng)的(de)幼蟲進行(xing)毒(du)(du)(du)(du)性(xing)(xing)(xing)試(shi)(shi)驗，在試(shi)(shi)驗前24小時僅將(jiang)成年生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)轉(zhuan)移(yi)到繁(fan)殖(zhi)容器中(zhong)。Daphnia magna的(de)具體飼養(yang)方法(fa)在我們(men)之前的(de)論文中(zhong)有所描述3,4)。從生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)降(jiang)(jiang)解溶液(ye)(ye)中(zhong)取出用(yong)于毒(du)(du)(du)(du)性(xing)(xing)(xing)試(shi)(shi)驗的(de)試(shi)(shi)驗溶液(ye)(ye)。每次試(shi)(shi)驗準(zhun)備(bei)四個裝有10mL試(shi)(shi)液(ye)(ye)的(de)試(shi)(shi)管，每個試(shi)(shi)管中(zhong)轉(zhuan)移(yi)5個試(shi)(shi)管。準(zhun)備(bei)兩個不含表面活性(xing)(xing)(xing)劑的(de)試(shi)(shi)管用(yong)于空白(bai)試(shi)(shi)驗。試(shi)(shi)管保持(chi)在16 h/8 h的(de)明暗頻率條件(jian)下，20?C。48小時后對(dui)死(si)亡(wang)和(he)固定的(de)個體進行(xing)計(ji)數(shu)。死(si)亡(wang)率的(de)計(ji)算方法(fa)是將(jiang)死(si)亡(wang)和(he)無(wu)法(fa)活動的(de)人數(shu)除(chu)以(yi)總人數(shu)。48 h毒(du)(du)(du)(du)性(xing)(xing)(xing)試(shi)(shi)驗中(zhong)的(de)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)降(jiang)(jiang)解會對(dui)毒(du)(du)(du)(du)性(xing)(xing)(xing)產生(sheng)(sheng)(sheng)影(ying)響(xiang)，但在本研(yan)究中(zhong)被忽略。

生物降解過程中對于表面活性劑AS、AE的表面活性以及水生生物毒性的性能的關系——摘要、簡介

生物降解過程中對于表面活性劑AS、AE的表面活性以及水生生物毒性的性能的關系——材料和方法

生物降解過程中對于表面活性劑AS、AE的表面活性以及水生生物毒性的性能的關系——結果與討論

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