摘要

精(jing)(jing)(jing)子(zi)(zi)結合(he)(he)劑(ji)(BSP)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)是(shi)牛精(jing)(jing)(jing)漿中的(de)(de)(de)(de)主(zhu)要(yao)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)，已知部(bu)分嵌入(ru)精(jing)(jing)(jing)子(zi)(zi)膜的(de)(de)(de)(de)外葉并與含膽堿(jian)的(de)(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)結合(he)(he)存在(zai)(zai)于(yu)其中。這種插入(ru)對冷(leng)凍保存后的(de)(de)(de)(de)精(jing)(jing)(jing)液(ye)質(zhi)(zhi)量產(chan)生負面(mian)影響通(tong)過(guo)誘(you)導精(jing)(jing)(jing)子(zi)(zi)的(de)(de)(de)(de)早期獲(huo)能(neng)。表(biao)面(mian)特(te)性(xing)(xing)假(jia)設BSP蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)通(tong)過(guo)張力(li)測量來(lai)檢查(cha)：BSP蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)具有高度的(de)(de)(de)(de)表(biao)面(mian)活性(xing)(xing)。這個(ge)表(biao)明BSP蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)不(bu)僅(jin)可(ke)以(yi)(yi)通(tong)過(guo)相(xiang)互作用到達被磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)覆蓋(gai)的(de)(de)(de)(de)界面(mian)兩(liang)者之(zhi)間也是(shi)由于(yu)它(ta)們(men)自身的(de)(de)(de)(de)表(biao)面(mian)活性(xing)(xing)。BSP蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)插入(ru)精(jing)(jing)(jing)子(zi)(zi)的(de)(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)域外葉是(shi)在(zai)(zai)仿生系統（如(ru)朗繆爾）上復制(zhi)的(de)(de)(de)(de)單(dan)層。BSP蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)插入(ru)可(ke)以(yi)(yi)在(zai)(zai)含有膽堿(jian)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)可(ke)壓(ya)縮流(liu)體(ti)域中進行。單(dan)層膜也用于(yu)研究(jiu)BSP蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)復合(he)(he)由兩(liang)個(ge)磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)組裝(zhuang)體(ti)：來(lai)自蛋(dan)(dan)黃或(huo)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)的(de)(de)(de)(de)低(di)密(mi)度脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(LDL)來(lai)自卵磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)。不(bu)考(kao)慮磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)結構（脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)或(huo)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)），BSP是(shi)阻(zu)礙改變膜的(de)(de)(de)(de)結構。只(zhi)有BSP蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)：磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)酰膽堿(jian)的(de)(de)(de)(de)總(zong)體(ti)比(bi)例(li)很重要(yao)。兩(liang)種螯(ao)合(he)(he)劑(ji)的(de)(de)(de)(de)區別在(zai)(zai)于(yu)它(ta)們(men)的(de)(de)(de)(de)表(biao)面(mian)特(te)性(xing)(xing)：LDL有很強的(de)(de)(de)(de)與外層融(rong)合(he)(he)的(de)(de)(de)(de)趨勢，而(er)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)體(ti)主(zhu)要(yao)留在(zai)(zai)外層相(xiang)同的(de)(de)(de)(de)時間尺度。

一、簡介

精(jing)(jing)子(zi)(zi)(zi)蛋(dan)(dan)白結(jie)合劑(ji)(BSP)是一(yi)個(ge)(ge)已知的(de)(de)蛋(dan)(dan)白質(zhi)(zhi)家(jia)族在(zai)(zai)輸(shu)卵(luan)(luan)管精(jing)(jing)子(zi)(zi)(zi)儲(chu)存庫的(de)(de)形(xing)成(cheng)中(zhong)(zhong)發揮(hui)作用在(zai)(zai)精(jing)(jing)子(zi)(zi)(zi)獲能中(zhong)(zhong)，這(zhe)是受精(jing)(jing)必(bi)不可(ke)少的(de)(de)精(jing)(jing)子(zi)(zi)(zi)成(cheng)熟(shu)步驟[1,2]。在(zai)(zai)牛精(jing)(jing)漿中(zhong)(zhong)，三個(ge)(ge)專(zhuan)業以10:1:1的(de)(de)比例[3]對BSP蛋(dan)(dan)白進(jin)(jin)行鑒定和(he)(he)分類根據(ju)Manjunath等人的(de)(de)命名法確定。[2]：BSP1[4]，BSP3[5]和(he)(he)BSP5[6,7]，分別。他們的(de)(de)表觀(guan)質(zhi)(zhi)量BSP1和(he)(he)BSP3為15–16.5 kDa，BSP5為28–30 kDa[6,8]。這(zhe)三種蛋(dan)(dan)白質(zhi)(zhi)由一(yi)個(ge)(ge)獨特(te)的(de)(de)N端結(jie)構(gou)域(yu)組成(cheng)然后是兩個(ge)(ge)纖(xian)連蛋(dan)(dan)白II型結(jie)構(gou)域(yu)。只有(you)N端三種BSP蛋(dan)(dan)白的(de)(de)結(jie)構(gou)域(yu)差異很大(da)[4-6]。每個(ge)(ge)纖(xian)連蛋(dan)(dan)白II型結(jie)構(gou)域(yu)包含一(yi)個(ge)(ge)磷酸(suan)膽(dan)堿(jian)(jian)結(jie)合站點(dian)[9-14]。最后那些對于生(sheng)物的(de)(de)生(sheng)物學作用是必(bi)不可(ke)少的(de)(de)BSP蛋(dan)(dan)白質(zhi)(zhi)。事(shi)實上(shang)，精(jing)(jing)子(zi)(zi)(zi)膜(mo)的(de)(de)外葉在(zai)(zai)射精(jing)(jing)過程中(zhong)(zhong)與含有(you)BSP蛋(dan)(dan)白的(de)(de)精(jing)(jing)漿接觸(chu)[2,15]。BSP蛋(dan)(dan)白快速結(jie)合含膽(dan)堿(jian)(jian)的(de)(de)磷脂(zhi)，如(ru)磷脂(zhi)酰膽(dan)堿(jian)(jian)和(he)(he)存在(zai)(zai)于精(jing)(jing)子(zi)(zi)(zi)膜(mo)上(shang)的(de)(de)鞘(qiao)磷脂(zhi)[9,12,16-19]和(he)(he)通過部分插(cha)入精(jing)(jing)子(zi)(zi)(zi)的(de)(de)外部來(lai)覆蓋精(jing)(jing)子(zi)(zi)(zi)的(de)(de)表面(mian)精(jing)(jing)子(zi)(zi)(zi)質(zhi)(zhi)膜(mo)的(de)(de)小(xiao)葉[1,13,20]。這(zhe)是第一(yi)個(ge)(ge)形(xing)成(cheng)輸(shu)卵(luan)(luan)管精(jing)(jing)子(zi)(zi)(zi)儲(chu)存的(de)(de)關鍵步驟水(shui)庫和(he)(he)精(jing)(jing)子(zi)(zi)(zi)獲能之后。BSP蛋(dan)(dan)白既(ji)可(ke)溶又可(ke)插(cha)入疏水(shui)膜(mo)的(de)(de)事(shi)實爭論BSP蛋(dan)(dan)白質(zhi)(zhi)的(de)(de)兩親性特(te)征。因此，該本研究的(de)(de)第一(yi)部分旨(zhi)在(zai)(zai)通過進(jin)(jin)行張力(li)測(ce)量來(lai)檢驗這(zhe)一(yi)假(jia)設(she)。

BSP蛋白誘導的(de)早期獲能[21,22]具有冷(leng)凍(dong)保存后對精(jing)液質量的(de)負面影響失去(qu)抗寒性(xing)和抗凍(dong)性(xing)[12,17,23-25]。

因(yin)(yin)此，保護者的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)存(cun)在(zai)(zai)對于(yu)(yu)維持精(jing)(jing)(jing)子(zi)(zi)質(zhi)(zhi)(zhi)量(liang)。蛋(dan)黃(huang)被(bei)廣泛用(yong)于(yu)(yu)隔離BSP蛋(dan)白[17,26-32]。這種隔離是(shi)由于(yu)(yu)特定的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)和(he)(he)強(qiang)大(da)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)外層磷(lin)(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)酰膽(dan)堿(jian)之(zhi)(zhi)間(jian)(jian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)相(xiang)(xiang)互作用(yong)蛋(dan)黃(huang)中存(cun)在(zai)(zai)低(di)密度脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)白(LDL)，以及BSP蛋(dan)白[9,12,33,34]。在(zai)(zai)某些情況(kuang)下(xia)，精(jing)(jing)(jing)子(zi)(zi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)保護還假設對抗(kang)LDL的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)早期獲能由富含(han)LDL的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)極性脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)之(zhi)(zhi)間(jian)(jian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)交換產(chan)生磷(lin)(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)和(he)(he)精(jing)(jing)(jing)子(zi)(zi)膜(mo)(mo)中的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)減(jian)少和(he)(he)膽(dan)固(gu)醇(chun)(chun)由于(yu)(yu)外流[29]。其(qi)他磷(lin)(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)，如大(da)豆(dou)卵磷(lin)(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)目(mu)前被(bei)用(yong)作磷(lin)(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)替代品(pin)蛋(dan)黃(huang)。然而，在(zai)(zai)這種情況(kuang)下(xia)，之(zhi)(zhi)間(jian)(jian)可能的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)相(xiang)(xiang)互作用(yong)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體和(he)(he)膜(mo)(mo)是(shi)未知的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。因(yin)(yin)此，第二部分(fen)本研究的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)目(mu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是(shi)比較(jiao)低(di)密度脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)白和(he)(he)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體與脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)膜(mo)(mo)接觸(chu)。為此，一(yi)空氣-緩沖液界(jie)面(mian)(mian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)單(dan)層脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)用(yong)于(yu)(yu)模(mo)擬精(jing)(jing)(jing)子(zi)(zi)膜(mo)(mo)外葉的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)結(jie)構(gou)域。這個方法(fa)被(bei)證明是(shi)有效的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)復制異(yi)質(zhi)(zhi)(zhi)牛外葉脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)域的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)域精(jing)(jing)(jing)子(zi)(zi)膜(mo)(mo)[35]。最(zui)后(hou)(hou)一(yi)個由主要脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)成分(fen)，即鞘磷(lin)(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)、膽(dan)固(gu)醇(chun)(chun)、1-palmitoyl-2-docosahexaenoyl-sn-glycero-3-phosphocholine(PC)和(he)(he)縮(suo)醛磷(lin)(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)1-(1Z-octadecenyl)-2-docosahexaenoyl-snglycero-3-phosphocholine(P-PC)。在(zai)(zai)這個單(dan)層中，膽(dan)固(gu)醇(chun)(chun)和(he)(he)鞘磷(lin)(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)將(jiang)自身結(jie)構(gou)化(hua)(hua)為縮(suo)合結(jie)構(gou)域被(bei)PC和(he)(he)P-PC的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)液體混(hun)合物包圍，溫度為34°C。低(di)密度脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)白和(he)(he)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體被(bei)引入單(dan)層下(xia)方的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)亞(ya)相(xiang)(xiang)在(zai)(zai)接近與生物膜(mo)(mo)相(xiang)(xiang)關的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)壓力(li)下(xia)[36]。添加劑(ji)和(he)(he)單(dan)層之(zhi)(zhi)間(jian)(jian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)相(xiang)(xiang)互作用(yong)是(shi)通過監測表面(mian)(mian)積(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)變化(hua)(hua)來檢(jian)測。最(zui)后(hou)(hou)，該(gai)低(di)密度脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)白和(he)(he)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)體對BSP蛋(dan)白的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)螯合特性在(zai)(zai)相(xiang)(xiang)同(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)模(mo)型外小葉上進行了(le)比較(jiao)。精(jing)(jing)(jing)子(zi)(zi)膜(mo)(mo)和(he)(he)在(zai)(zai)相(xiang)(xiang)同(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)條件(jian)下(xia)。

應用不同組裝的磷脂酰膽堿對牛精漿蛋白的隔離——摘要、簡介

應用不同組裝的磷脂酰膽堿對牛精漿蛋白的隔離——材料與方法

應用不同組裝的磷脂酰膽堿對牛精漿蛋白的隔離——結果與討論

應用不同組裝的磷脂酰膽堿對牛精漿蛋白的隔離——結論、致謝！