三、結果

3.1. 精漿的界面特性

精(jing)漿 SDS-PAGE 電(dian)泳顯示 存在一系列 14 至 120 kDa 的多肽 具有不同的比例(li)（圖 1），與(yu)之前的研究結(jie)果(guo)一致 [37]。 14 至 5 個主要頻段的比例(li) 在泳道 4 上估(gu)計為 30 kDa。

在(zai)大約 16–17 kDa（74% 強度）。 它們(men)被歸因于(yu)(yu) BSP1 和(he) BSP3 [12]。 在(zai)約 28 kDa (9%) 處檢(jian)測(ce)到(dao)(dao)第二條(tiao)帶 對(dui)應(ying)于(yu)(yu) BSP5 [12]。 BSP1、BSP3 和(he) BSP5 的集合(he)代表了(le)精液中所含最小多肽的 83%。 血漿（在(zai)整個提取(qu)物中約占 65% [17]）。 另一(yi)個樂隊是 檢(jian)測(ce)到(dao)(dao) 22 kDa (4%) 和(he)一(yi)個在(zai) 14 kDa (13%) 對(dui)應(ying)于(yu)(yu) 一(yi)種核糖核酸酶 [22]。

通(tong)(tong)過跟蹤精漿水溶(rong)液的(de)表(biao)(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)張(zhang)(zhang)力(li)(li)來突出(chu)這些(xie)組分的(de)表(biao)(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing) （圖 2）與(yu)濃度(du)（Gibbs 膜）。 的(de)表(biao)(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)張(zhang)(zhang)力(li)(li) 新鮮樣品(pin)(pin)被(bei)證明相對較(jiao)低 (47 mN/m) 并且增加了 因(yin)為樣品(pin)(pin)被(bei)稀釋了。 表(biao)(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)張(zhang)(zhang)力(li)(li)值等于(yu)(yu)純(chun)緩(huan)沖(chong)液-空氣(qi)(qi)界面(mian)(mian)(mian)的(de)值 (72 mN/m)。 1/100000 的(de)大稀釋。 因(yin)此，精漿顯(xian)(xian)(xian)示(shi)出(chu)顯(xian)(xian)(xian)著的(de)表(biao)(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)：首(shou)先，新鮮樣品(pin)(pin)的(de)表(biao)(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)張(zhang)(zhang)力(li)(li) (47 mN/m) 與(yu)眾所周知的(de)表(biao)(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)蛋白（如牛血(xue)清白蛋白 [38] 或溶(rong)菌酶(mei)）獲得的(de)值一樣低 [39]其次，表(biao)(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)仍(reng)然存在(zai)于(yu)(yu)大范(fan)圍(wei)(wei)內 濃度(du)范(fan)圍(wei)(wei)（需要稀釋 100,000 以去除(chu) 它）。 除(chu)此之(zhi)外(wai)，還分析了表(biao)(biao)(biao)面(mian)(mian)(mian)膜的(de)穩(wen)定性(xing)(xing)(xing) 通(tong)(tong)過執行朗繆爾薄膜在(zai)空氣(qi)(qi) - 緩(huan)沖(chong)界面(mian)(mian)(mian)處(chu)。 薄膜的(de)壓(ya)(ya)縮等溫線(xian)（圖 3）顯(xian)(xian)(xian)示(shi)出(chu)顯(xian)(xian)(xian)著增加 分兩步從 0 到(dao) 35 mN/m 的(de)壓(ya)(ya)力(li)(li)。在(zai) 18.9 mN/m 時，有(you) 是與(yu)空氣(qi)(qi)-緩(huan)沖(chong)液界面(mian)(mian)(mian)處(chu)分子構象變(bian)化有(you)關的(de)斜坡(po)破裂。 壓(ya)(ya)縮能力(li)(li) 膜在(zai)升高的(de)壓(ya)(ya)力(li)(li)下（大約與(yu)生物膜相關的(de)壓(ya)(ya)力(li)(li)，25 mN/m）顯(xian)(xian)(xian)示(shi)出(chu)膜的(de)高穩(wen)定性(xing)(xing)(xing) 由血(xue)漿精液成分形成。

圖 2 牛氣水界面(mian)表面(mian)張(zhang)力(li)（±標準(zhun)差） 精漿溶液(ye)中所含蛋白質濃度的函數(shu) 提取并以對(dui)數(shu)刻(ke)度表示 (T = 23.2 ?C ± 0.3 ?C, n = 2, 4 次重復 每個樣品）。

圖 3. 表面(mian)壓力-面(mian)積(ji) (?-A) 等溫線形(xing)(xing)成于 通過傳(chuan)播精漿形(xing)(xing)成空氣/緩沖液(ye)界(jie)面(mian)（n = 3，標準偏差 在 0-18.9 mN/m 范圍(wei)內(nei)不超過 1.5 mN/m，在 1.2 mN/m 范圍(wei)內(nei)不超過 18.9–38 mN/m)。

3.2. 低密度脂蛋白和脂質體對仿生外傳單的作用 精子膜

低(di)密度脂(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)白(bai)和脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)引(yin)入(ru)(ru)亞相的(de)(de)(de)(de)影響 精子膜(mo)仿生外(wai)葉的(de)(de)(de)(de)示(shi)意(yi)圖(tu) 在圖(tu) 4. 對(dui)于控制(zhi)測量（沒(mei)有注(zhu)入(ru)(ru)任(ren)何(he)保護劑，設計為(wei)圖(tu) 4 中的(de)(de)(de)(de) M），表面積(ji)略有下(xia)降 隨著時(shi)間(jian)的(de)(de)(de)(de)推移。 當低(di)密度脂(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)白(bai)被(bei)注(zhu)射(she)到低(di)于 重建的(de)(de)(de)(de)外(wai)葉（圖(tu) 4 中的(de)(de)(de)(de) M/LDL 曲線(xian)），它導(dao)致了 表面積(ji)的(de)(de)(de)(de)快速和大量增加。 相比之下(xia)，注(zhu)入(ru)(ru) 脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)（圖(tu) 4 中的(de)(de)(de)(de)曲線(xian) M/C4）幾乎(hu)沒(mei)有改(gai)變薄膜(mo)壓(ya)力 單層(ceng)(ceng)與參考(kao)單層(ceng)(ceng)的(de)(de)(de)(de)比較（曲線(xian) 米）。 脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)從脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)中摻入(ru)(ru)的(de)(de)(de)(de)動力學 單層(ceng)(ceng)比低(di)密度脂(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)白(bai)要慢得(de)多。 因此，有一個弱 在時(shi)間(jian)尺度上脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)在空氣-水界(jie)面的(de)(de)(de)(de)吸(xi)附(fu) 對(dui)應于精液(ye)的(de)(de)(de)(de)制(zhi)備。

圖 4. 被(bei)覆蓋的(de)界(jie)(jie)面(mian)的(de)相對表(biao)面(mian)積(ji)隨時間變(bian)化 單層 (M) 以 25 mN/m 壓縮并在含有 (——) 沒有額(e)外的(de)分子，(...) LDL（4.6 毫(hao)克 PC）和（—）脂質體 C4（含有 4.8 毫(hao)克 PC）。 空氣(qi)-緩沖(chong)液(ye)界(jie)(jie)面(mian)的(de)溫(wen)度為(wei) 34°C。

在低(di)密(mi)度(du)脂(zhi)(zhi)(zhi)蛋白的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)情(qing)況(kuang)下(xia)(xia)，注(zhu)(zhu)射(she)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)酰膽堿的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)量 根據低(di)密(mi)度(du)脂(zhi)(zhi)(zhi)蛋白的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)組成，估計為 4.6 毫克 [33]。 在脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)情(qing)況(kuang)下(xia)(xia)，分(fen)散體(ti)含有(you) 6.55 ± 0.02 mg 脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)，即 4.8 毫克磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)酰膽堿。 大(da)幅增加(jia) 在重建的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)外層(ceng)下(xia)(xia)注(zhu)(zhu)射(she)低(di)密(mi)度(du)脂(zhi)(zhi)(zhi)蛋白后的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)表(biao)面積 精(jing)(jing)子膜的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)小葉可(ke)(ke)能(neng)(neng)(neng)(neng)與(yu)精(jing)(jing)子的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)能(neng)(neng)(neng)(neng)力有(you)關 低(di)密(mi)度(du)脂(zhi)(zhi)(zhi)蛋白在空(kong)氣-水界(jie)(jie)面處(chu)自(zi)發吸(xi)附和(he)(he)(he)擴(kuo)(kuo)散 [33]。 界(jie)(jie)面處(chu)低(di)密(mi)度(du)脂(zhi)(zhi)(zhi)蛋白的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)容(rong)易破壞可(ke)(ke)能(neng)(neng)(neng)(neng)會釋(shi)放 具有(you)表(biao)面活性的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)和(he)(he)(he)蛋白質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)以及不(bu)溶的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)甘油三酯 [33]。 在脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)情(qing)況(kuang)下(xia)(xia)，平衡 雙層(ceng)形成磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)和(he)(he)(he)單層(ceng)形成磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)之間 磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)取決于鏈不(bu)飽和(he)(he)(he)度(du)、鏈長(chang)和(he)(he)(he) 極(ji)性頭基 [40]。 考慮雞蛋的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)主要(yao)成分(fen) 卵磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi) (PC 74%) 及其脂(zhi)(zhi)(zhi)肪酸(suan)組成 [41]，有(you) 大(da)約 48% 的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)飽和(he)(he)(he) PC 和(he)(he)(he) 52% 的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)不(bu)飽和(he)(he)(he) PC。在這項(xiang)工(gong)作的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)溫(wen)度(du)下(xia)(xia)，飽和(he)(he)(he) PC 沒有(you)熔(rong)化，可(ke)(ke)能(neng)(neng)(neng)(neng)不(bu)會 在界(jie)(jie)面處(chu)擴(kuo)(kuo)散，而(er)不(bu)飽和(he)(he)(he)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)則遠遠超過 它們(men)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)熔(rong)化溫(wen)度(du)并可(ke)(ke)能(neng)(neng)(neng)(neng)擴(kuo)(kuo)散。 在剩(sheng)余部分(fen) PE (11%) 中，雙層(ceng)和(he)(he)(he)單層(ceng)形成之間的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)平衡 磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)與(yu)磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)構密(mi)切(qie)相(xiang)關 所以不(bu)能(neng)(neng)(neng)(neng)給他們(men)下(xia)(xia)結(jie)論(lun)。 因(yin)此(ci)，不(bu)存(cun)在 基本解(jie)釋(shi)。 雞蛋脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)缺乏吸(xi)附可(ke)(ke)能(neng)(neng)(neng)(neng) 可(ke)(ke)以解(jie)釋(shi)為它們(men)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)傳播(bo)以前已經(jing)(jing) 在自(zi)由界(jie)(jie)面上(shang)檢查：單層(ceng)已經(jing)(jing)存(cun)在于 界(jie)(jie)面可(ke)(ke)能(neng)(neng)(neng)(neng)會限制基于磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)擴(kuo)(kuo)散 在其他地方被認(ren)為是散裝的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)高穩(wen)定性物體(ti)， 特別(bie)是當(dang)由磷(lin)脂(zhi)(zhi)(zhi)酰膽堿組成時。

3.3. 通過低密度脂蛋白隔離精漿成分和 脂質體

當牛精漿(jiang) (SP) 被注(zhu)射(she)到 單(dan)層，分子面(mian)(mian)積(ji)(ji)的(de)(de)(de)變化在一個(ge) 時間(jian)的(de)(de)(de)函數（圖(tu) 5 中的(de)(de)(de)曲線 M/SP）。 表面(mian)(mian)積(ji)(ji)沒(mei)有立即增加(jia)(jia)，而是(shi)在 150 秒(miao)后(hou)(hou)才(cai)增加(jia)(jia)，因(yin)為 脂質(zhi)的(de)(de)(de)界面(mian)(mian)。 它在 150 秒(miao)內達(da)到最(zui)大值(zhi)（300 秒(miao)后(hou)(hou) 注(zhu)入）然后(hou)(hou)它穩定了(le) 300 秒(miao)并(bing)隨著時間(jian)的(de)(de)(de)推移緩(huan)慢下(xia)降 （圖(tu)5）。 表面(mian)(mian)積(ji)(ji)的(de)(de)(de)快速增加(jia)(jia)揭(jie)示(shi)了(le)良好的(de)(de)(de)表面(mian)(mian) SP 成分的(de)(de)(de)活性（最(zui)有可能是(shi)蛋(dan)白質(zhi)），如圖(tu)所示(shi) 在圖(tu)中。 2 和 3. 600 秒(miao)后(hou)(hou)表面(mian)(mian)積(ji)(ji)的(de)(de)(de)減少為 與純(chun)單(dan)層的(de)(de)(de)速度相(xiang)同。 因(yin)此，BSP 蛋(dan)白 吸附后(hou)(hou)留在界面(mian)(mian)上。

圖 5. 被覆蓋的(de)界面(mian)的(de)相對表(biao)(biao)面(mian)積隨時間變化(hua) 單層 (M) 并在包含 (——) 的(de)緩沖液(ye)上形成，沒有額外的(de)分子， 注射 (. . .) SP（26.6 ± 1.5 mg 蛋(dan)白(bai)(bai)質(zhi)）后，SP（26.6 ± 1.5 mg 蛋(dan)白(bai)(bai)質(zhi)）和不同濃度(du)的(de)脂(zhi)質(zhi)體 (— · · —) C1, (— —) C2, (- · —) C3 和 (- · -) C4（分別為 1.17 ± 0.02 mg、2.18 ± 0.02 mg、4.37 ± 0.02 mg 和 6.55 ± 0.02 毫(hao)(hao)克脂(zhi)質(zhi)）和 (- - -) 低密度(du)脂(zhi)蛋(dan)白(bai)(bai)（4.6 毫(hao)(hao)克 PC）和 SP 的(de)混合物 （26.6 ± 1.5 毫(hao)(hao)克蛋(dan)白(bai)(bai)質(zhi)）。 空氣-緩沖液(ye)界面(mian)的(de)溫度(du)為 34°C。 這 表(biao)(biao)面(mian)壓(ya)力保持在 25 mN/m。

當低(di)密(mi)度(du)(du)脂(zhi)蛋(dan)白與(yu)(yu)牛精漿混(hun)合時 蛋(dan)白質(zhi)(zhi)重(zhong)量比為 10:1 (BSP:LDLs) 并(bing)注射(she)到單層下方，單層的(de)(de)分(fen)子面(mian)積(ji)隨時間記錄 幾乎沒有變(bian)化(hua)（曲線(xian) M/SP + LDL，圖(tu) 5）。 肩(jian)膀(bang)出現(xian)在(zai) 大(da)約(yue) 400 s 揭示了(le) BSP 蛋(dan)白的(de)(de)弱吸(xi)附（這 肩(jian)部代表(biao) M/SP 的(de)(de) 5%，上圖(tu)曲線(xian)）。 然后，該 1000s后分(fen)子面(mian)積(ji)的(de)(de)變(bian)化(hua)減少并(bing)穩定。 不會像 M 和(he) M/SP 曲線(xian)的(de)(de)變(bian)化(hua)那樣減少， 表(biao)明 LDLs 成分(fen)的(de)(de)吸(xi)附，與(yu)(yu) 它們(men)在(zai)界面(mian)處(chu)的(de)(de)高擴散能(neng)力(li)（曲線(xian) M/LDL，圖(tu) 4）。 因(yin)(yin)此(ci)，SP 中所含 BSP 蛋(dan)白在(zai)界面(mian)處(chu)的(de)(de)吸(xi)附 由(you)于低(di)密(mi)度(du)(du)脂(zhi)蛋(dan)白而大(da)大(da)降低(di)，并(bing)且(qie) BSP/低(di)密(mi)度(du)(du)脂(zhi)蛋(dan)白的(de)(de)比率非常高 接近最佳值以完全防止 BSP 蛋(dan)白質(zhi)(zhi)影響單層。 磷(lin)脂(zhi)酰膽(dan)堿(jian)注射(she)量 根據低(di)密(mi)度(du)(du)脂(zhi)蛋(dan)白的(de)(de)組成估(gu)計為 4.61 毫克 [33]。 因(yin)(yin)此(ci)，注射(she)了(le) 4.61 mg LDLs 的(de)(de)磷(lin)脂(zhi)酰膽(dan)堿(jian) 26.6mg精漿蛋(dan)白質(zhi)(zhi)，即1mg精漿蛋(dan)白質(zhi)(zhi)需要0.17mg磷(lin)脂(zhi)酰膽(dan)堿(jian)。

脂(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)（不同(tong)濃度）對(dui) BSP 的(de)作用 蛋白質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)也(ye)顯示在圖5中(zhong)。 脂(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)被(bei)引(yin)入(ru)(ru) 在進(jin)入(ru)(ru)亞(ya)相之前與(yu)(yu)精漿(jiang)接觸。 隨(sui)著脂(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)中(zhong)濃度的(de)增加（曲線 M/SP + C1 到(dao)(dao)(dao) C4), BSP 吸附引(yin)起的(de)表(biao)面積增加 蛋白質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)逐漸延(yan)遲和減(jian)少。當量(liang)(liang) 達到(dao)(dao)(dao) 4.37 mg (C3)，仍有少量(liang)(liang) BSP 界面處的(de)蛋白質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)，由(you) 1600 秒的(de)肩部(bu)證明。 在 最高濃度 (C4)，未摻入(ru)(ru) BSP 蛋白 觀(guan)察(cha)到(dao)(dao)(dao)，分子(zi)面積的(de)變(bian)化甚至(zhi)比(bi)(bi)對(dui)照曲線更負，表(biao)明 亞(ya)相中(zhong)的(de)膜組分。 因此，脂(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)作用于 BSP 蛋白與(yu)(yu) LDL 的(de)作用方式相同(tong)。 最有趣的(de)比(bi)(bi)例似乎介于 C3 和 C4 之間。 它是(shi)從(cong) 建立面積變(bian)化之間相互作用的(de)曲線 和作為脂(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)注(zhu)射的(de)磷脂(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)量(liang)(liang)（圖 6）。 這 注(zhu)入(ru)(ru) 26.6 mg BSP 的(de)最佳質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)量(liang)(liang)為 4.6 mg，即 PC:BSP 比(bi)(bi)率為 0.16 (w/w)。

圖 6. 相(xiang)對面積隨注(zhu)射脂質(zhi)(zhi)體(ti)質(zhi)(zhi)量的變(bian)化 進入亞相(xiang)。 線性(xing)回歸是通過(guo) R2 為 0.992 獲得的。

3.4. 脂質體作用的顯微鏡評價 精漿(jiang)

通(tong)過(guo)透射電(dian)子顯(xian)微鏡 (TEM) 檢(jian)查脂(zhi)質體或 LDL 與(yu)(yu)(yu)含有(you)(you) BSP 蛋(dan)白(bai)的(de)(de)(de) SP 的(de)(de)(de)混合物(wu)(wu) 并與(yu)(yu)(yu)對照進行比較(jiao)。 對應(ying)的(de)(de)(de)圖(tu)片(pian) 無論放大(da)(da)倍數如何，精漿都沒有(you)(you)表現出(chu)結(jie)構(gou)(gou)（圖(tu)S1）。 相反，與(yu)(yu)(yu)低密(mi)(mi)度脂(zhi)蛋(dan)白(bai)相關的(de)(de)(de)結(jie)構(gou)(gou) 和(he)(he)脂(zhi)質體很容易通(tong)過(guo) (i) LDL 的(de)(de)(de)致密(mi)(mi)和(he)(he)相當圓(yuan)形的(de)(de)(de)形狀(zhuang) (圖(tu) 7A) 和(he)(he) (ii) 圓(yuan)形和(he)(he)有(you)(you)時 脂(zhi)質體的(de)(de)(de)多(duo)層(ceng)(ceng)結(jie)構(gou)(gou)（圖(tu) 7B）。 在......的(de)(de)(de)存在下(xia) 精漿，整組圖(tu)像分析仍(reng)顯(xian)示 圓(yuan)形物(wu)(wu)體。 它們的(de)(de)(de)大(da)(da)小平均與(yu)(yu)(yu)分析的(de)(de)(de)相似 沒有(you)(you)螯合劑（圖(tu)S2）。 然而，在幾個地(di)方(fang) 在SP存在的(de)(de)(de)情(qing)況(kuang)下(xia)，一些大(da)(da)的(de)(de)(de)圓(yuan)形物(wu)(wu)體表征 通(tong)過(guo)（i）被厚層(ceng)(ceng)包圍(wei)的(de)(de)(de)原生結(jie)構(gou)(gou)（圖(tu)7C） 低密(mi)(mi)度脂(zhi)蛋(dan)白(bai)）或（ii）圓(yuan)環內的(de)(de)(de)致密(mi)(mi)核心（圖(tu) 7D 與(yu)(yu)(yu) 觀(guan)察到(dao)脂(zhi)質體和(he)(he)圖(tu) S3)。 與(yu)(yu)(yu)圖(tu) 7B 相比， 與(yu)(yu)(yu)精漿混合的(de)(de)(de)脂(zhi)質體系(xi)統(tong)地(di)出(chu)現 比天(tian)然脂(zhi)質體密(mi)(mi)度更大(da)(da)的(de)(de)(de)核心。 這(zhe)些新結(jie)構(gou)(gou)可(ke)能(neng)是由于滲透而導(dao)致膜破(po)裂的(de)(de)(de)結(jie)果(guo)。 BSP 蛋(dan)白(bai)進入界面層(ceng)(ceng)，導(dao)致 TEM 對比。

圖 7. (A) LDLs、(B) 脂質體(ti)(ti)、(C) LDLs 和(he)(he)精(jing)漿(jiang)（精(jing)漿(jiang)中的(de)比例(li)為 0.17 mg PC/mg BSP 蛋白）和(he)(he) (D) 脂質體(ti)(ti)和(he)(he)精(jing)漿(jiang)的(de)冷凍 TEM 圖像 （精(jing)漿(jiang)中 0.16 mg PC 脂質體(ti)(ti)/mg BSP 蛋白的(de)比率(lv)）。

四、討論

4.1. BSP 蛋白的表面特性及其可能 生物學作用

張(zhang)力測(ce)定結果(guo)表明精(jing)漿中(zhong)含(han)有表面(mian)活(huo)性(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)分。 這些最有可(ke)(ke)能(neng) 蛋(dan)(dan)白(bai)質，因為它(ta)們(men)(men)構(gou)成(cheng)(cheng)(cheng)了精(jing)漿的(de)主要(yao)部分。 他們(men)(men) 由一系列親(qin)水(shui)性(xing)和疏(shu)水(shui)性(xing)的(de) 域(yu) [5] 賦予(yu)它(ta)們(men)(men)兩親(qin)特性(xing)。 考慮到(dao)生物(wu)學背(bei)景，我們(men)(men)可(ke)(ke)以(yi)(yi)(yi)假設 BSP 蛋(dan)(dan)白(bai)可(ke)(ke)以(yi)(yi)(yi) 由于它(ta)們(men)(men)與(yu) PC 的(de)相(xiang)互作用和它(ta)們(men)(men)自身的(de)表面(mian)活(huo)性(xing)，到(dao)達被磷(lin)脂覆蓋的(de)界(jie)面(mian)。 這可(ke)(ke)以(yi)(yi)(yi)解釋(shi)為什(shen)么 這個過(guo)程很(hen)快 [42]。將肽或蛋(dan)(dan)白(bai)質插入到(dao) 磷(lin)脂單層通常在流(liu)體(ti)域(yu)中(zhong)進行 比(bi)壓縮(suo)(suo)(suo)(suo)域(yu)更可(ke)(ke)壓縮(suo)(suo)(suo)(suo) [43]。 在 34°C，流(liu)體(ti)域(yu)由縮(suo)(suo)(suo)(suo)醛磷(lin)脂和不飽和磷(lin)脂酰膽堿組成(cheng)(cheng)(cheng) [35]。 因此，BSP 蛋(dan)(dan)白(bai)可(ke)(ke)以(yi)(yi)(yi)輕(qing)松穿(chuan)透這些流(liu)體(ti)域(yu)，在那里它(ta)們(men)(men)可(ke)(ke)以(yi)(yi)(yi)立即相(xiang)互作用 根(gen)據(ju)前(qian)面(mian)提到(dao)的(de)涉及疏(shu)水(shui)腔(qiang)的(de)機制，使用含(han)磷(lin)酸膽堿的(de)分子(zi) [11,12,34,42,44–46]。 BSP吸附量(liang)可(ke)(ke)能(neng)有限 通過(guo)流(liu)體(ti)域(yu)的(de)可(ke)(ke)壓縮(suo)(suo)(suo)(suo)性(xing)。 總而言之，BSP 蛋(dan)(dan)白(bai)一旦被吸附，就會保持錨(mao)定在界(jie)面(mian)上，這要(yao)歸功(gong)于 它(ta)們(men)(men)的(de)表面(mian)特性(xing)（我們(men)(men)的(de)工作），構(gou)象重排 [47] 及其與(yu)膜成(cheng)(cheng)(cheng)分的(de)強(qiang)相(xiang)互作用 [48]。

4.2. 脂質體和低密度脂蛋白在 BSP 隔離中的效率 蛋白質

我(wo)們的(de)(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)果(guo)表明(ming)(ming)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)與 LDL 一樣(yang)有(you)(you)效 防止 BSP 蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)到達界面，提供 使用(yong)正(zheng)確比(bi)率(lv)(lv)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)/BSP。 對于(yu)(yu)(yu)低(di)(di)(di)密度(du)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)，我(wo)們的(de)(de)(de)(de)(de)(de)模型表明(ming)(ming) BSP/LDL 的(de)(de)(de)(de)(de)(de)比(bi)率(lv)(lv) (10:1 w/w)，常(chang)用(yong)于(yu)(yu)(yu)冷凍保(bao)存 非常(chang)接近完全阻止 BSP 蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)最佳值 從影響(xiang)單層(ceng)(ceng)。 PC/BSP 與 PC 組織(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)比(bi)率(lv)(lv) 低(di)(di)(di)密度(du)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de) 0.17 毫克磷脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)酰(xian)膽堿對應 1 毫克精漿蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)。 同(tong)(tong)樣(yang)，脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)最佳比(bi)例 PC/BSP 是 0.16 mg 磷脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)酰(xian)膽堿用(yong)于(yu)(yu)(yu) 1 mg 精漿蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)。 知道雞蛋(dan)(dan)中(zhong) PC 的(de)(de)(de)(de)(de)(de)比(bi)例可(ke)(ke)能取決于(yu)(yu)(yu)喂養， 低(di)(di)(di)密度(du)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)中(zhong) PC 的(de)(de)(de)(de)(de)(de)比(bi)例可(ke)(ke)能因批(pi)次而異，因此(ci)這些 比(bi)率(lv)(lv)被(bei)認為(wei)是相等的(de)(de)(de)(de)(de)(de)。 該比(bi)率(lv)(lv)與 LDL 或(huo)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)隔(ge)離結(jie)構(gou)(gou)無關(guan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)事實表明(ming)(ming) 來(lai)自(zi) LDL 的(de)(de)(de)(de)(de)(de)載脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)不與 BSP 結(jie)合(he)(he)，盡(jin)管(guan)這 綁定(ding)是可(ke)(ke)能的(de)(de)(de)(de)(de)(de) [26,49]。 更(geng)引(yin)人注目的(de)(de)(de)(de)(de)(de)是，這個結(jie)果(guo)表明(ming)(ming) PC 組裝為(wei) LDL 中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)單層(ceng)(ceng)或(huo)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)雙(shuang)層(ceng)(ceng)都沒有(you)(you)影響(xiang)。 在(zai)(zai)低(di)(di)(di)密度(du)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)情況下，磷脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi) 占據外(wai)單層(ceng)(ceng)，所有(you)(you)這些都可(ke)(ke)以(yi)被(bei) 蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)。 相反，只有(you)(you)外(wai)葉的(de)(de)(de)(de)(de)(de)磷脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi) 形成(cheng)單層(ceng)(ceng)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)雙(shuang)層(ceng)(ceng)實際(ji)上是直接 與 BSP 蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)接觸(chu)。 由于(yu)(yu)(yu)絡合(he)(he)比(bi)相同(tong)(tong) 脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)和(he)低(di)(di)(di)密度(du)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)，以(yi)及 PC 分子 (74%) 也構(gou)(gou)成(cheng)內部(bu) 雙(shuang)層(ceng)(ceng)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)小(xiao)(xiao)葉，這些小(xiao)(xiao)葉也參與 BSP 蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)復合(he)(he)。 符合(he)(he)BSP的(de)(de)(de)(de)(de)(de)輕松插入(ru) 蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)進入(ru)疏(shu)水膜，這些可(ke)(ke)以(yi)遷移 朝向(xiang)內部(bu)小(xiao)(xiao)葉并引(yin)起一些破裂/融合(he)(he) 通過 TEM 觀察到脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)雙(shuang)層(ceng)(ceng)。 盡(jin)管(guan)如(ru)此(ci)變化 低(di)(di)(di)密度(du)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)和(he)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)構(gou)(gou)在(zai)(zai) 樣(yang)品(pin)和(he) BSP 蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)可(ke)(ke)以(yi)被(bei)認為(wei)主要錨定(ding)在(zai)(zai) 低(di)(di)(di)密度(du)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)和(he)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)表面。 在(zai)(zai)更(geng)高的(de)(de)(de)(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)體(ti)：BSP 比(bi)率(lv)(lv) 與這里研究的(de)(de)(de)(de)(de)(de)相比(bi)，BSP1 是 BSP 中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)主要蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi) 家族誘(you)導脂(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)囊泡的(de)(de)(de)(de)(de)(de)伸(shen)長和(he)形成(cheng) 向(xiang)小(xiao)(xiao)囊泡進化的(de)(de)(de)(de)(de)(de)珠子項鏈狀結(jie)構(gou)(gou)或(huo) 線(xian)狀結(jie)構(gou)(gou)[50]。

應用不同組裝的磷脂酰膽堿對牛精漿蛋白的隔離——摘要、簡介

應用不同組裝的磷脂酰膽堿對牛精漿蛋白的隔離——材料與方法

應用不同組裝的磷脂酰膽堿對牛精漿蛋白的隔離——結果與討論

應用不同組裝的磷脂酰膽堿對牛精漿蛋白的隔離——結論、致謝！