材料和方法

材料

HFBII疏水(shui)蛋(dan)白（Mw=7200 Da）從(cong)芬蘭VTT生物(wu)(wu)技術公司(si)獲得，并如(ru)其他地方所述從(cong)里氏木霉中提取(qu)。28,29含有20 mM醋(cu)酸緩沖(chong)液的5 mg ml 1 HFBII溶液在小(xiao)(xiao)瓶中冷(leng)凍。 在實驗前不(bu)久(jiu)，將小(xiao)(xiao)瓶內容(rong)物(wu)(wu)解凍，用微孔水(shui)稀(xi)釋5*并進(jin)行(xing)短暫(zan)的超聲波處理(li)，以打破可使(shi)樣品渾(hun)濁(zhuo)的自組裝結(jie)構。 

純b-lg和b-酪蛋白購自Sigma chemicals（德國施奈爾多夫）。 Quillaja皂甙粉末來自沙漠(mo)之王（智利(li)圣地亞哥(ge)）。 黃原膠（冷分散Keltrol RD）購自CP Kelco（比(bi)利(li)時貝林根）。

方法

泡(pao)(pao)(pao)沫制備和(he)穩(wen)定(ding)性評(ping)估。 通過(guo)向50 g脫氣(qi)水中添加所需量的(de)(de)(de)(de)材料(liao)制備發(fa)泡(pao)(pao)(pao)劑溶(rong)液(ye)(ye)(ye)。 另(ling)外，以類似方式制備0.5 wt%黃(huang)原膠溶(rong)液(ye)(ye)(ye)，該(gai)溶(rong)液(ye)(ye)(ye)不含溶(rong)解過(guo)程(cheng)中形成(cheng)(cheng)的(de)(de)(de)(de)氣(qi)泡(pao)(pao)(pao)。 將(jiang)(jiang)溶(rong)液(ye)(ye)(ye)在(zai)20℃下(xia)輕(qing)輕(qing)混(hun)合(he)30分(fen)(fen)鐘。 隨后(hou)(hou)，使(shi)用手持式Aero latte微型混(hun)合(he)器（英國Radlett）對發(fa)泡(pao)(pao)(pao)劑溶(rong)液(ye)(ye)(ye)進(jin)行充氣(qi)，該(gai)混(hun)合(he)器連接至4.5 V的(de)(de)(de)(de)恒定(ding)電源。獲(huo)得(de)約200 ml的(de)(de)(de)(de)恒定(ding)端體(ti)積(ji)(ji)，形成(cheng)(cheng)約0.75的(de)(de)(de)(de)氣(qi)相(xiang)體(ti)積(ji)(ji)。 制備完(wan)成(cheng)(cheng)后(hou)(hou)，將(jiang)(jiang)該(gai)相(xiang)對干燥(zao)的(de)(de)(de)(de)泡(pao)(pao)(pao)沫與(yu)黃(huang)原膠溶(rong)液(ye)(ye)(ye)輕(qing)輕(qing)混(hun)合(he)，以將(jiang)(jiang)氣(qi)相(xiang)體(ti)積(ji)(ji)調節至0.5。 在(zai)該(gai)相(xiang)體(ti)積(ji)(ji)分(fen)(fen)數下(xia)，氣(qi)泡(pao)(pao)(pao)體(ti)積(ji)(ji)低于緊(jin)密(mi)堆積(ji)(ji)30，從而將(jiang)(jiang)聚結的(de)(de)(de)(de)可(ke)能性降至最(zui)低。 最(zui)后(hou)(hou)，黃(huang)原膠引起的(de)(de)(de)(de)體(ti)積(ji)(ji)屈服(fu)應力可(ke)防(fang)止氣(qi)泡(pao)(pao)(pao)在(zai)與(yu)此處提供的(de)(de)(de)(de)實驗相(xiang)關的(de)(de)(de)(de)時間內形成(cheng)(cheng)奶(nai)(nai)油(you)狀。31通過(guo)抑制奶(nai)(nai)油(you)狀和(he)聚結，可(ke)使(shi)用濁(zhuo)度測量來(lai)測量歧化率。

隨時間變化的氣泡(pao)尺寸(cun)演變。 使(shi)用濁度(du)掃(sao)描實驗室專家（法國圖盧茲Formulaction）及時通過濁度(du)法研究20 ml泡(pao)沫(mo)的樣品體積(ji)。 我們(men)解釋(shi)了沿泡(pao)沫(mo)樣品高度(du)的平均后(hou)向散(san)射，不(bu)包(bao)括(kuo)頂部(bu)和底(di)部(bu)部(bu)分，其(qi)中后(hou)向散(san)射受邊緣效應影響。 后(hou)向散(san)射（BS）與穿過樣品的光的傳輸平均自由(you)程（l）有關

反過來，光的(de)傳輸平(ping)均自由程與(yu)穿(chuan)過的(de)氣(qi)泡的(de)平(ping)均直徑(jing)（d）和(he)體積分數（F）有關

其中g和Q是(shi)Mie理論給出的(de)光學常(chang)數。 在本研究中，我們將僅限于(yu)解釋平均氣泡(pao)直徑隨時間的(de)變化(hua)，其表示為相對(dui)直徑d（t）/d（0）。 粗(cu)化(hua)時間tcoarse由該(gai)模(mo)型確定

用朗繆爾槽(cao)(cao)(cao)測量小變(bian)形和大(da)變(bian)形膨脹流(liu)(liu)變(bian)學。 對(dui)于(yu)空氣/水(shui)表(biao)面的(de)(de)(de)表(biao)面膨脹流(liu)(liu)變(bian)學實驗，我們(men)使(shi)用了(le)Kibron公司（芬蘭埃(ai)斯波(bo)）生產的(de)(de)(de)MicroTroughX Langmuir槽(cao)(cao)(cao)。 槽(cao)(cao)(cao)的(de)(de)(de)表(biao)面積為(wei)11×800平方毫米，其亞相體(ti)積約為(wei)15 mL。使(shi)用超靈(ling)敏(min)的(de)(de)(de)KiBron傳感器、小直徑（0.51 mm）的(de)(de)(de)特殊合(he)金絲(si)在槽(cao)(cao)(cao)的(de)(de)(de)中部測量表(biao)面張(zhang)力(li)。 靈(ling)敏(min)度優(you)于(yu)0.01mnm-1。

通過使用(yong)10 ml Hamilton注(zhu)射器沿表面(mian)逐(zhu)滴均(jun)勻分(fen)布所需(xu)量的(de)溶液(ye)來制備鋪展層(ceng)。 壓(ya)(ya)縮前，將(jiang)該層(ceng)保(bao)持平衡15分(fen)鐘。 隨(sui)后，以(yi)(yi)5 mm min 1的(de)屏障速度(du)將(jiang)表面(mian)壓(ya)(ya)縮至(zhi)30 mN min 1的(de)表面(mian)壓(ya)(ya)力或(huo)2000 mm2的(de)最小面(mian)積，然(ran)后以(yi)(yi)相同速度(du)將(jiang)其松(song)弛，恢(hui)復(fu)至(zhi)約零壓(ya)(ya)力。 溫度(du)為20℃。

使(shi)(shi)用內部開發的(de)軟件工具計(ji)算膨脹模(mo)量。 該工具首(shou)先(xian)通過使(shi)(shi)用N階切比(bi)雪(xue)夫(fu)多項式對(dui)測量的(de)P–A曲線(xian)(xian)進行(xing)分(fen)割和平(ping)滑來減少數據和噪聲(sheng)。 然(ran)后使(shi)(shi)用解析樣條導數表達(da)式數值(zhi)計(ji)算模(mo)量，使(shi)(shi)我們能夠計(ji)算沿實驗P–A曲線(xian)(xian)的(de)任意點(dian)處的(de)膨脹模(mo)量。

使用橢(tuo)偏(pian)儀(yi)測量表面(mian)吸附。 使用Multiskop橢(tuo)偏(pian)儀(yi)裝置（Multiskop，Optrel，德國）對朗繆爾槽中的(de)吸附層進行表征。 該儀(yi)器的(de)全部細節可在別處找到。32

橢(tuo)偏儀(yi)(yi)是(shi)一(yi)種研究表(biao)面(mian)(mian)和薄膜的技術，其基礎是(shi)利用偏振光束(shu)從(cong)界面(mian)(mian)或薄膜反射或透射時發生(sheng)的偏振變換。33在橢(tuo)偏儀(yi)(yi)中，測量兩個量J和D， 式(shi)中，J是(shi)角(jiao)，其切線是(shi)全反射系數大小的比率，由下式(shi)給出：

其中| Rp |和(he)(he)(he)| Rs |是p（平(ping)行(xing)）和(he)(he)(he)s（垂(chui)直）偏振光的出(chu)射(she)波(bo)振幅與入(ru)射(she)波(bo)振幅之比。 j的值可以在0到90°之間。 有(you)關(guan)所討論樣品(pin)的信息(xi)包(bao)含在全反(fan)射(she)系數(shu)或Rp和(he)(he)(he)Rs中。橢(tuo)偏角 ? 描述反(fan)射(she)時發生的相位差變化(hua)。 其值可以在零和(he)(he)(he)360°之間變化(hua)。

橢偏(pian)測(ce)量(liang)的(de)基本方程是(shi)

式(shi)中ρ=Rp/Rs。現在可以使用de Feijter方程34確定吸附量

式(shi)中(zhong)，nf是(shi)薄膜(mo)折(zhe)射(she)率，n0是(shi)介質(zhi)折(zhe)射(she)率，dn/dc是(shi)折(zhe)射(she)率增量，df是(shi)薄膜(mo)厚度，由適當的(de)D/J軌跡導出。 在分析中(zhong)，我(wo)們使用(yong)(yong)了nf=1.4和dn/dc=0.18 ml g 1，這在之前用(yong)(yong)于b-lg.35

表(biao)面(mian)剪(jian)切流(liu)變(bian)學（SSR）測量。 使(shi)用Anton Paar Physica MCR 300流(liu)變(bian)儀測定(ding)空氣-水表(biao)面(mian)的界(jie)面(mian)剪(jian)切剛度，該流(liu)變(bian)儀配備雙錐幾何結構(gou)，精(jing)確放置(zhi)在空氣和(he)蛋白質或表(biao)面(mian)活性劑(ji)溶(rong)液之間的界(jie)面(mian)。36吸附系統老化1小時后， 在0.001至1 Hz的頻率范圍內，在0.2%的應變(bian)下施加振(zhen)蕩剪(jian)切變(bian)形。

探索泡沫粗化與表面流變學之間的關聯性疏水性蛋白——摘要、介紹

探索泡沫粗化與表面流變學之間的關聯性疏水性蛋白——材料和方法

探索泡沫粗化與表面流變學之間的關聯性疏水性蛋白——結果和討論

探索泡沫粗化與表面流變學之間的關聯性疏水性蛋白——結論、致謝！