結果

與測(ce)試化(hua)(hua)(hua)合物(wu)(wu)孵育后脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)CMC的(de)(de)(de)變(bian)化(hua)(hua)(hua)。帶負(fu)電荷的(de)(de)(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)diC8PS本質(zhi)上是兩親性的(de)(de)(de)，在(zai)水溶液中(zhong)(zhong)聚(ju)集并形成膠束，產(chan)生(sheng)更親脂(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)微環(huan)境(jing)。當Prodan與膠束相(xiang)互作用(yong)時(shi)，其(qi)熒光(guang)發射發生(sheng)了變(bian)化(hua)(hua)(hua)。從diC8PS的(de)(de)(de)熒光(guang)濃(nong)度(du)(du)分布中(zhong)(zhong)觀察到不(bu)(bu)連續(xu)性（圖2），過渡脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)濃(nong)度(du)(du)為(wei)其(qi)CMC（CMCL=1.1毫克/毫升；L-脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)）。該CMC值與Vitovic在(zai)類似測(ce)試條(tiao)件下使用(yong)表面張(zhang)力方法測(ce)定(ding)的(de)(de)(de)值相(xiang)似。27當將測(ce)試化(hua)(hua)(hua)合物(wu)(wu)硫利(li)扎定(ding)添加到基質(zhi)中(zhong)(zhong)時(shi)，復合物(wu)(wu)（CMCDL；DL，藥物(wu)(wu)脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)復合物(wu)(wu)）的(de)(de)(de)CMC變(bian)為(wei)0.042 mg/mL(圖2)。在(zai)樣品中(zhong)(zhong)脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)濃(nong)度(du)(du)高于0.5 mg/mL時(shi)，熒光(guang)信號(hao)被淬滅(mie)，給出較低的(de)(de)(de)值；但這(zhe)并不(bu)(bu)影響CMC的(de)(de)(de)確定(ding)。CMCDL和CMCL之間的(de)(de)(de)比率被用(yong)來量化(hua)(hua)(hua)這(zhe)種轉(zhuan)變(bian)。

測定了45種(zhong)商業化合(he)物(wu)(wu)的(de)(de)藥物(wu)(wu)脂(zhi)質復合(he)物(wu)(wu)的(de)(de)CMC值(zhi)，并與在(zai)人(ren)(ren)類(lei)(lei)、動物(wu)(wu)或培(pei)養細胞中觀察到的(de)(de)PLD進(jin)(jin)行(xing)比較（表1）。正如文獻中所建議的(de)(de)那樣(yang)，這些化合(he)物(wu)(wu)分別分為(wei)四(si)類(lei)(lei)。19,27 CMC偏(pian)移(yi)的(de)(de)程度由CMC比率(CMCDL/CMCL)表示(shi)（圖3）。將(jiang)來(lai)自人(ren)(ren)類(lei)(lei)、動物(wu)(wu)或培(pei)養細胞的(de)(de)PLD數據與使用這種(zhong)熒光方法檢測到的(de)(de)CMC偏(pian)移(yi)進(jin)(jin)行(xing)比較（圖3）并使用CMC比率在(zai)

作為截(jie)止值0.75，大多數(shu)化(hua)合物(wu)在體(ti)內(nei)和體(ti)外數(shu)據之間表現出一致的排名(ming)，除了兩(liang)個：華(hua)(hua)法林(lin)和氨氯(lv)地平。據報(bao)道，華(hua)(hua)法林(lin)20和氨氯(lv)地平10體(ti)內(nei)PLD較低或沒有，但在該熒光測定中觀察到(dao)CMC變化(hua)。

濃(nong)(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)依(yi)(yi)(yi)賴(lai)(lai)性(xing)。體(ti)內研究中PLD的(de)程(cheng)度(du)(du)(du)(du)是劑量(liang)(liang)依(yi)(yi)(yi)賴(lai)(lai)性(xing)的(de)。24,33在體(ti)外試驗中，濃(nong)(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)控制(zhi)可用(yong)(yong)于估計(ji)劑量(liang)(liang)依(yi)(yi)(yi)賴(lai)(lai)性(xing)。一(yi)組七(qi)(qi)種(zhong)報告的(de)PLD誘(you)(you)(you)導(dao)劑分(fen)別以三種(zhong)不(bu)同的(de)濃(nong)(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)進行了測(ce)試：910、91和(he)9.1μM（圖4）。對(dui)于氯喹(kui)和(he)酮康唑，要么(me)它們在10 mM時不(bu)能(neng)完(wan)全溶解在DMSO中，要么(me)在使(shi)用(yong)(yong)10 mM DMSO儲備液時與緩沖液混(hun)合(he)(he)(he)(he)后鹽析出來，它們的(de)最高濃(nong)(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)點被去除。所(suo)有(you)化(hua)合(he)(he)(he)(he)物都表現出對(dui)CMC的(de)濃(nong)(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)依(yi)(yi)(yi)賴(lai)(lai)性(xing)，以不(bu)同程(cheng)度(du)(du)(du)(du)改變PLD誘(you)(you)(you)導(dao)潛力。即使(shi)在910μM時，芬氟拉明似(si)乎(hu)也(ye)是一(yi)種(zhong)弱誘(you)(you)(you)導(dao)劑，而(er)硫利達嗪在不(bu)同濃(nong)(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)之(zhi)間(jian)顯示(shi)出顯著變化(hua)。根據該體(ti)外數據，在9.1μM的(de)最低(di)濃(nong)(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)下，七(qi)(qi)種(zhong)化(hua)合(he)(he)(he)(he)物中沒有(you)一(yi)種(zhong)似(si)乎(hu)能(neng)夠(gou)誘(you)(you)(you)導(dao)PLD。復(fu)合(he)(he)(he)(he)自(zi)聚合(he)(he)(he)(he)。與磷脂類似(si)，大多數PLD誘(you)(you)(you)導(dao)劑是兩親性(xing)的(de)。盡管帶有(you)不(bu)同的(de)電荷跡象，但(dan)它們也(ye)可以聚集并(bing)形(xing)成(cheng)膠束。拉貝洛(luo)(luo)爾(er)20,34和(he)奎尼(ni)丁35被報道為(wei)PLD誘(you)(you)(you)導(dao)劑；然(ran)而(er)，在所(suo)應(ying)用(yong)(yong)的(de)測(ce)試條(tiao)件下，我(wo)們無(wu)法確定(ding)任(ren)何一(yi)種(zhong)藥物脂質(zhi)(zhi)復(fu)合(he)(he)(he)(he)物的(de)CMC。獲得的(de)RFU值(zhi)等于或(huo)低(di)于空白（含熒光(guang)探針但(dan)不(bu)含脂質(zhi)(zhi)的(de)化(hua)合(he)(he)(he)(he)物）中的(de)值(zhi)。進一(yi)步研究了不(bu)同藥物濃(nong)(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)但(dan)沒有(you)脂質(zhi)(zhi)（0 mg/mL脂質(zhi)(zhi)），并(bing)且在無(wu)脂質(zhi)(zhi)測(ce)定(ding)緩沖液中，拉貝洛(luo)(luo)爾(er)和(he)奎寧的(de)CMC值(zhi)分(fen)別為(wei)26和(he)20μM。這(zhe)些CMC值(zhi)遠低(di)于這(zhe)些化(hua)合(he)(he)(he)(he)物在PLD篩選中的(de)測(ce)試濃(nong)(nong)(nong)度(du)(du)(du)(du)，并(bing)且懷疑(yi)化(hua)合(he)(he)(he)(he)物的(de)自(zi)聚集會干擾(rao)藥物脂質(zhi)(zhi)復(fu)合(he)(he)(he)(he)物形(xing)成(cheng)的(de)檢測(ce)，從而(er)使(shi)CMCDL無(wu)法確定(ding)。

代(dai)謝(xie)物誘導(dao)的(de)PLD。為(wei)(wei)了研究代(dai)謝(xie)對PLD的(de)影響，選(xuan)擇了10種具有主(zhu)(zhu)要(yao)代(dai)謝(xie)事件的(de)化(hua)(hua)合(he)物，并使用報(bao)告的(de)測(ce)定篩選(xuan)了它們(men)的(de)主(zhu)(zhu)要(yao)代(dai)謝(xie)物，表現出不同的(de)行為(wei)(wei)（圖5和(he)(he)表2）。去(qu)乙基胺碘酮是胺碘酮的(de)主(zhu)(zhu)要(yao)代(dai)謝(xie)物，其脂質結(jie)合(he)能力比其母體高(gao)近10倍。對于氯喹、氯氮平(ping)和(he)(he)米(mi)安(an)色林，它們(men)的(de)代(dai)謝(xie)物屬于PLD非誘導(dao)劑(ji)組(zu)，與作為(wei)(wei)誘導(dao)劑(ji)的(de)母體化(hua)(hua)合(he)物相矛盾。由于溶解度(du)限制，8-羥基米(mi)安(an)色林和(he)(he)去(qu)甲(jia)基氯氮平(ping)的(de)測(ce)試濃(nong)度(du)為(wei)(wei)0.091 mM，低(di)于其母體化(hua)(hua)合(he)物的(de)濃(nong)度(du)(1 mM)。

表1

 與它(ta)們的母體(ti)化合物相(xiang)(xiang)比，其他代謝物顯示(shi)出相(xiang)(xiang)當的PLD誘導潛力，而其他代謝物則(ze)沒(mei)有(you)。

圖3.在pH 7.2的(de)(de)(de)熒光測定(ding)中觀察到的(de)(de)(de)CMC偏移（由藥物脂(zhi)質復合物(DL)的(de)(de)(de)CMC和單獨的(de)(de)(de)脂(zhi)質(L)的(de)(de)(de)CMC之間的(de)(de)(de)比(bi)率表示：CMCDL/CMCL）與(yu)體(ti)內(nei)人(ren)體(ti)內(nei)的(de)(de)(de)比(bi)較體(ti)內(nei)動物或(huo)體(ti)外(wai)細胞PLD分析(xi)。CMCDL/CMCL的(de)(de)(de)臨界值(zhi)為(wei)0.75，將(jiang)PLD誘導劑(ji)（b，體(ti)內(nei)測定(ding)；[，細胞測定(ding)）與(yu)PLD非誘導劑(ji)(9)分開，只有兩個(ge)異常值(zhi)：氨氯地平和華法林(lin)。

圖4.CMC移位(wei)（通過將藥(yao)物-脂(zhi)(zhi)質復合(he)(he)物（DL的CMC之間的比率表(biao)示）和單(dan)獨(du)的脂(zhi)(zhi)質（L）的CMC：CMC測試化(hua)合(he)(he)物與二FF erent科幻最終在濃度樣品孔(kong)在pH7.2。

測定pH影響。PLD中(zhong)(zhong)的(de)脂質(zhi)紊亂(luan)主要(yao)在(zai)構成酸(suan)(suan)性的(de)溶(rong)酶體區(qu)室中(zhong)(zhong)觀察到(dao)環境。為了(le)模擬溶(rong)酶體條(tiao)件(jian)，pH 4.8醋酸(suan)(suan)鹽(yan)在(zai)PLD篩選研(yan)究中(zhong)(zhong)使用緩沖(chong)液(ye)，25種(zhong)進行(xing)研(yan)究使用上(shang)述相(xiang)同的(de)程序(xu)商(shang)業化(hua)合物(wu)(wu)（表1）對。大(da)多數化(hua)合物(wu)(wu)在(zai)結果相(xiang)似兩種(zhong)緩沖(chong)液(ye)中(zhong)(zhong)的(de)；然而，胺碘酮(tong)、氯米(mi)帕明(ming)、米(mi)安色林(lin)和(he)華(hua)法(fa)林(lin)給出了(le)截然不同的(de)數據，將(jiang)前三種(zhong)化(hua)合物(wu)(wu)從PLD誘(you)導(dao)劑(ji)(ji)轉移(yi)到(dao)非誘(you)導(dao)劑(ji)(ji)，將(jiang)華(hua)法(fa)林(lin)劑(ji)(ji)轉移(yi)從非誘(you)導(dao)到(dao)誘(you)導(dao)劑(ji)(ji)，從pH 7.2到(dao)pH 4.8。

Delta-8使用新方法測試CMC，而不是表面張力測試法——摘要

Delta-8使用新方法測試CMC，而不是表面張力測試法——方法

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